第三节重组子的筛选与鉴定.pptVIP

四、免疫化学检测法 　(二)免疫沉淀检测法 　　　检测分泌型产物。 　　1. 原理：抗原——抗体凝集反应。 　　2. 方法 　把非放射性抗体加到平板培养基中，当插入基因的表达产物被细菌分泌到菌落周围时，就会与抗体反应形成“沉淀圈”。 对于不能被分泌到菌体外的蛋白质可先进行原位溶菌处理（溶菌酶、原噬菌体诱发）。 四、免疫化学检测法 　(三)酶联免疫吸附测定（ELISA） 　　　　Enzyme-linked immunosorbant assay 　1. 原理： 　　一抗（primary antibody）: 与目标分子特异结合。 　　二抗（secondary antibody）： 与一抗特异性结合。 　　酶连（enzyme-linke）： 二抗上携带一种酶能催化一种反应将无色的底物转变为有色的物质（或发光），再通过比色测定有色物质的含量（或光强度），从而推测目标分子的含量。 四、免疫化学检测法 待测基因 产物蛋白 一抗 二抗 酶 待测基因 产物蛋白 一抗 二抗 无色的底物 有色的产物 比色观察 酶 四、免疫化学检测法 　(三)酶联免疫吸附测定（ELISA） 　　2. ELISA检测的一般步骤 　　（1）固定样品 　　　将待测样品加入96孔微量滴定板（microtiter plate）的孔中，干燥后就被固定在孔底。 孔底 四、免疫化学检测法 　(三)酶联免疫吸附