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闪式提取法用于紫草的工艺条件研究 　　[摘要]以左旋紫草素、羟基萘醌总色素的提取率为评价指标，对比闪式提取、回流提取、超声提取对紫草中有效成分的提取效果，采用正交设计综合评分法对闪式提取的工艺参数进行优化。结果表明，闪式提取法提取效率最高，优选的闪式提取最佳工艺为95%乙醇提取3次，每次90 s。在此工艺条件下左旋紫草素、羟基萘醌总色素提取率分别为93.16%，93.89%，出膏率为5.16%。闪式提取法适于紫草有效成分的提取，通过正交试验设计优选的紫草闪式提取工艺稳定、切实可行。 　　[关键词]闪式提取；紫草；左旋紫草素；羟基萘醌总色素 　　紫草为紫草属紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma （Royle） Johnst.或内蒙紫草A. guttata Bunge.的根，其主要有效成分为羟基萘醌总色素类，包括乙酰紫草素（acetylshikonin），β-羟基异戊酰紫草素（β-hydro-xyisovalerylshikonin），左旋紫草素（shikonin），β，β′-二甲基丙烯酰紫草素 （β，β′-dimethylacrylshikonin）等。具有凉血、活血、清热、解毒的功效。其中左旋紫草素为其抗炎、抗菌、抗肿瘤的主要活性成分[1-2]。紫草常用油浸（炸）法或用乙醇采取渗漉、回流、超声等方法进行提取，闪式提取法在紫草中的应用未见报道。闪式提取技术作为一种快速提取技术，近年来受到广泛关注，具有快速、高效的特点，而且不需加热、节省能源，与传统提取方法相比具有显著的优势[3-4]。本研究以羟基萘醌总色素和左旋紫草素的提取率及出膏率为指标，探讨了不同提取方法和不同溶剂对羟基萘醌总色素、左旋紫草素提取率的影响。并采用正交设计对闪式提取工艺条件进行了优选，为紫草中有效成分的提取提供了简便、快捷的新方法。 　　1 材料 　　JHBE-20A闪式提取器（河南金鼐科技发展有限公司）；BSA224S-C电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；T6紫外分光光度计（北京普析通用有限责任公司）；U3000自动进样高效液相色谱仪（戴安）；DHG-9070A电热恒温鼓风干燥箱（杭州爱普仪器设备有限公司）；LDZ5-2离心机（北京雷勃尔离心机有限公司）。 　　左旋紫草素（中国食品药品检定研究院，批号110769-200405）；95%乙醇（北京琼洁酒精销售有限公司，批；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 　　紫草购自北京仟草中药饮片有限公司，产地新疆，批号090606001，经中国中医科学院中药研究所郝近大研究员鉴定，为A. euchroma。 　　2 方法与结果 　　2.1 紫草提取液中羟基萘醌总色素含量测定方法[5] 　　按照2010年版《中国药典》紫草项下羟基萘醌总色素含量测定方法进行操作，定量量取紫草提取液适量置于量瓶中，用乙醇定容。在516 nm波长下测定吸收值，按左旋紫草素的吸收系数为242计算羟基萘醌总色素的含量。 　　2.2 紫草提取液出膏率的测定 　　定量量取相当于1 g生药量的紫草提取液至已称重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱中于105 ℃烘干3 h，在干燥器中冷却至室温后称重，计算出膏率。 　　2.3 紫草提取液中左旋紫草素的含量测定[6] 　　2.3.1 色谱条件 Diamonsil-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-1%甲酸溶液（70∶30），流速1 mL·min-1；检测波长516 nm；柱温25 ℃。色谱图见图1，在上述色谱条件下左旋紫草素分离度良好。 　　2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取左旋紫草素对照品0.005 09 g，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品储备液。 　　2.3.3 供试品溶液的制备 分别取各提取液经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。 　　2.3.4 标准曲线的制备 分别精密移取对照品储备液0.5，1，2，4，8，10 mL至10 mL量瓶中，甲醇定容，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，分别精密吸取10 μL进样，以峰面积为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=0.180 7x-0.032 7，r=1.000，左旋紫草素在5.09～101.8 mg·L-1线性关系良好。 　　2.3.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，以2.3.1项下色谱条件重复进样6次，左旋紫草素峰面积的RSD为0.25%，表明仪器精密度良好。 　　2.3.6 稳定性试验 取同一份样品溶液，以2.3.1项下色谱条件分别于0，2，4，8，12，24 h进样分析，测得左旋紫草素峰面积的RSD为0.25%，表明样品在24 h内稳定性良好。 　　2.3.7 重复性试验 取紫草粉末2 g