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JIANGXI AGRICULTURAL UNIVERSITY 本 科 毕 业 论 文（设 计） 题目： 洋葱伯克霍尔德菌油酸缺陷型菌株的选育 学 院：生物科学与工程学院 姓 名： 俞益侠 学 号： 专 业： 生物技术 班 级： 生物技术081班 指导教师: 吴晓玉 职 称：教授 二0一二年五月 目录 摘要 I Abstract II 1 引言 1 2 材料与方法 3 2.1 材料 3 2.1.1 菌种 3 2.1.2 培养基 3 2.1.3 相关溶液 3 2.1.4 主要试剂 4 2.1.5 主要仪器 4 2.2 方法 4 2.2.1 生长曲线测定 4 2.2.2 诱变筛选方法 5 2.2.3 突变株的保存 6 3 结果与分析 7 3.1 菌体生长曲线的绘制 7 3.2 浅蓝菌素抑菌浓度 7 3.3 中间培养时间确定 8 3.4 NTG诱变致死率 8 3.5 浅蓝菌素筛选致死率 8 3.6 生长谱法鉴定 9 3.7 浅蓝菌素耐受菌株稳定性试验及产量测定 10 4 小结 11 参考文献 12 致谢 13  摘要 洋葱伯克霍尔德菌是一组基因型不同表型相近的复合物，是引起囊性纤维化(ystic fibrosis，CF)的重要条件致病菌，也是医院感染的重要病原菌之一。N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍NTG）对原始菌株洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)T1828G两株抗浅蓝菌素Y-1和Y-7本实验分离筛选的油酸缺陷型菌株可为研究实验材料N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍NTG） Abstract Burkholderia cepacia is a group of genotype-phenotype similar complexes is an important opportunistic pathogen causing cystic fibrosis, one of the important pathogens of nosocomial infection. In this study, the breeding of the mutant strain of Burkholderia cepacia acid, Cerulenin selection mark by the chemical mutagen N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine （NTG） on the original strain of Burkholderia cepacia T1828G artificialmutagenesis were screened by two strains of anti-cerulenin oleic acid-deficient strain Y-1 and Y-7, this experiment was isolated oleic acid-deficient strains to bacterial fatty acid enzyme as a target selectionbuild the fatty acid enzyme inhibitor screening model to experimental materials, applied research foundation laid by Burkholderia cepacia. Key words：Burkholderia cepacia；leic acid-deficient；；N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine （NTG）1 引言 营养缺陷型是一类代谢障碍突变株，常由结构基因突变引起合成代谢中的一个酶失活直接使某个生化反应发生遗传性障碍，使菌株丧失合成某种物质的能力，导致该菌株在培养基中不添加这种物质，就无法生长。与其相对应的是野生型菌株。营养缺陷型菌株在工业微生物的设计育种、遗传学及医学等领域都有着重要的作用[-2]。周盛[]使用亚硝基胍和亚硝基甲基脲复合诱变筛选得到一株以甘油，琥珀酰CoA和乙醛酸为碳源的营养缺陷型，该突变株的产酸率和转化率分别比出发菌株高18.1%和12.7%。Dulaney[]等将诱变得到的蛋氨酸缺陷型再诱变得到回复突变型，88%的突变株金霉素产量比原养型高1~3倍。 浅蓝菌素(cerulenin)是蓝色头孢霉的自然代谢产物，是脂肪酸和聚酮生物合