血清白蛋白分离20150622.pptVIP

血清白蛋白的分离、纯化与鉴定 实验目的 掌握血清白蛋白分离纯化的方法； 学会用盐析和离子交换柱层析法分离纯化蛋白质的原理与操作； 学习检测蛋白质纯度的方法. 原理与操作 一、猪血清白蛋白的初步分离 1.实验目的 掌握血液样品的正确处理和制备方法, 掌握血清白蛋白粗分离的一般方法。 2. 实验内容： 采血 ； 血清分离； 盐析法分离血清白蛋白 ； 除盐 3. 实验原理 血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质，约占总量的60％。 它是一种水溶性很强的蛋白，结构稳定，能结合多种小分子，如脂肪酸，胆红素，血红素等，起维持血液的正常渗透压作用。 此外白蛋白还有解毒、参与脂类代谢及血浆中微溶物质的运输、维持血液酸碱平衡等作用，在医学临床及生物领域应用广泛 不同蛋白质的相对分子质量、溶解度以及在一定条件下带电的情况有所不同，可根据这些性质的差别，分离及提纯各种蛋白质。 本实验先用盐析法作初步分离。 盐析就是大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子的水化膜被剥夺,蛋白质分子所带的电荷被中和破坏了蛋白质溶胶的稳定因素，使蛋白质沉淀析出。 中性盐并不破坏蛋白质的分子结构和性质，因此，若除去中性盐或减低盐的浓度，蛋白质就会重新溶解。 在半饱和硫酸铵溶液中，血清白蛋白不沉淀，球蛋白沉淀，离心后白蛋白主要在上清液中。由于血清白蛋白的相对分子质量较硫酸铵大得多，故