第三章RNA结构与转录1201.ppt

生物化学专题 王海胜 中国农业科学院研究生院 [1]ρ在RNA的存在下能水解ATP 说明它能与新生RNA链结合，并可能应用ATP放出的能量将RNA链从酶和模板中释出。 [2]ρ可能与RNA聚合酶结合 编码ρ因子的基因rho发生突变时产生的某些ρ蛋白质仅能在RNA聚合酶的β亚基也发生相应突变时才能有RNA合成的活性。 [3]ρ因子是一种酶 已知RNA聚合酶本身能识别DNA模板中依赖ρ的终止顺序，而ρ因子是在以后才发挥作用而释出RNA的。即使是在没有ρ时，RNA聚合酶也在依赖ρ的终止子处暂停，不过以后仍继续向前进。故有人认为，即使有一个很弱的发夹也可使RNA聚合酶停止前进。此时ρ因子即可与之结合而将聚合酶和RNA解离下来。所以ρ因子也是一种酶。 E.coli存在两种转录终止调节方式： ? 衰减 RNA链过早终止 ? 抗终止 阻止终止的发生，使下游基因表达 对于其终止的情况了解很少 只有少数的例子搞得比较清楚 在爪蟾中有两个重要的rDNA转录终止位点：T2和T3。T2是28SrRNA序列3′末端下游约235bp序列。T3是排列在下一个转录单位的上游约200bp处T2和T3都含有7个碱基的保守序列：5′-GACTTGC-3′。 T2是前体rRNA转录的初始终止位点。 T3是作为“失败-保险”的终止位点， 由于rDNA转录单位是串联排列的，所以“失败-保险”终止系统让RNA Pol分子可能在一个转录单位上起始和转录 多数转录的初始产物无生物活性，在生物体内进 行加工处理后才具有生物活性。 转录后加工（post-transcriptional modification） （ post-transcriptional processing）: 是指将各种前体RNA分子加工转变成有功能的、 成熟的各种RNA(mRNA、rRNA或tRNA等) 的过程 真核的前体分子 tRNA数目多、成簇排列、初始转录本均为单顺反子、有基因间隔区 例如 爪蟾 tRNA基因数目＞200拷贝，酵母约有400个tRNA基因，是一种重复序列； 真核的前体分子 tRNA中含有内含子。 其加工过程要剪接内含子，都要加CCA（真核tRNA前体均为II型） 真核tRNA内含子的切除和其他内含子的切除是不同的： 典型的真核生物成熟的mRNA mRNA帽子功能： 加尾信号 如果改变5‘?AAUAAA?3’位置，加尾位点改变。 缺失5‘?AAUAAA?3’顺序，则不发生加尾。 富GU序列和紧随其后的富U序列对正常的加尾不可缺一， 如保留富GU顺序，除去富U顺序，加尾效率仅及对照的30%。 如保留富U顺序，除去富GU顺序，加尾效率降至10%。 同时缺失GU序列和富U序列，即使保留5‘?AAUAAA?3‘ 顺序也不能进行加尾。 此外，GU/U序列与5?AAUAAA?3顺序的相对位置也很重要，如在5?AAUAAA?3顺序的下游插入16 bp，加尾效率只有正常的10%。如在GU序列和富U序列之间插入5 bp，加尾效率丧失70%。 严格说来切割信号和加尾信号是不相同的。前体mRNA切割的位置处于5?AAUAAA?3下游15-25 nt之间，由切割酶专一性识别。poly（A）多聚酶只是利用已产生的3游离末端将腺苷酸逐个连接，加尾信号实际上是5?AAUAAA?3以及下游一段不能少于8 nt的顺序。一旦mRNA前体被切断之后，多聚腺苷酸化立即开始。多聚腺苷酸化可细分为两个阶段，首先依赖5?AAUAAA?3信号和与之结合的CPSF缓慢合成约10个核苷酸，然后依赖已合成的寡聚腺苷酸迅速在其末端加上200或更多个腺苷酸。 poly（A）的功能 增加mRNA的稳定性 将携带或缺少poly（A）的球蛋白mRNA注入到蛙卵中，结果发现，在6小时后缺少poly（A）的球蛋白mRNA不再进行翻译，而携带poly（A）的处理仍然正常合成球蛋白。最简单的解释是，poly（A）有助于增加mRNA的稳定性 提高mRNA翻译效率 mRNA的翻译需要PAB I（poly（A） binding protein I，poly（A）结合蛋白I）的蛋白参与，它们与poly（A）的结合可提高mRNA的翻译效率。如果在mRNA样品中加入过量的poly（A），可急剧降低蛋白质合成的数量。原因在于大量poly（A）与PAB I因子竟争性结合，使mRNA缺少必需的PAB I，因而不能有效翻译。此外适当延长poly（A）核苷酸数目可控制mRNA的翻译。活细胞中很少mRNA的poly（A）长度少于30 nt，低于这一长度mRNA不能翻译。 poly（