高效液相色谱法测定阿托伐他汀钙片有关物质.docVIP

高效液相色谱法测定阿托伐他汀钙片有关物质 　　摘 要：采用高效液相色谱法对阿托伐他汀钙片有关物质进行检测，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250mm×4.6mm，5μm），流动相为0.05mol/L柠檬酸溶液（用氨水调节pH值至4.0）-乙腈-四氢呋喃（53：27：20），检测波长为244nm，柱温为35℃，流速为1.5mL/min。结果表明，在所建立的色谱条件下，阿托伐他汀钙与各杂质分离良好，所建立的方法专属性、精密度、准确度、耐用性均较好，可用于阿托伐他汀钙片有关物质的测定。 　　关键词：阿托伐他汀钙片；有关物质；高效液相色谱法 　　心血管疾病是危害人类健康（特别是中老年）最常见、最严重的疾病之一，血脂异常是动脉粥样硬化、冠心病以及其他心脑血管疾病的重要危险因素。阿托伐他汀通过抑制肝脏内HMG-CoA还原酶和胆固醇的合成从而降低血浆中胆固醇和脂蛋白水平，并通过增加细胞表面的肝脏LDL受体以增强LDL的摄取和代谢。医学界公认比天然微生物发酵、半合成的他汀类药物好，患者使用时，起始剂量即有优异的调脂达标率。文章建立了以0.05mol/L柠檬酸溶液（用氨水调节pH值至4.0）-乙腈-四氢呋喃（53：27：20）为流动相的HPLC分析方法，用于对阿托伐他汀钙的测定[1-2]。该方法专属性良好，而且方法方便、快速、准确。 　　1 材料 　　1.1 仪器 　　高效液相色谱仪（Hitachi Chromaster-5430检测器，Hitachi Chromaster-5310柱温箱，Hitachi Chromaster-5210自动进样器，Hitachi Chromaster-5110泵），Chromaster色谱工作站，日本Hitachi公司；十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（250mm×4.0mm，5μm），美国Thermo公司； AR1140电子天平，美国Ohaus公司。 　　1.2 试剂 　　阿托伐他汀钙对照品（中国药品生物制品鉴定所）；阿托伐他汀钙杂质A、C、F、H对照品（USP标准物质）；乙腈、四氢呋喃为色谱纯试剂； 其余试剂为市售分析纯试剂；水为纯净水。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件与系统适应性 　　色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.05mol/L柠檬酸溶液（用氨水调节pH值至4.0）-乙腈-四氢呋喃（53：27：20）；流速：1.5ml/min；检测波长：244nm；柱温：35℃；进样量：20μl。理论塔板数按阿托伐他汀峰和阿托伐他汀钙杂质C峰计应不低于5000和7000，两峰的拖尾因子分别不得过1.5，两峰之间的分离度应不小于1.5。溶液重复进样5次，阿托伐他汀峰和阿托伐他汀钙杂质C峰的峰面积相对标准偏差应分别不得过1.0%和2.0%。 　　2.2 溶液配制 　　阿托伐他汀钙对照品溶液：取阿托伐他汀钙对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加混合溶剂[（0.05mol/L柠檬酸铵溶液（用氨水调节pH值至7.4）-乙腈（50：50）]适量，充分振摇使溶解后，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀即得。阿托伐他汀钙供试品溶液：取阿托伐他汀钙片20片，研细，精密称取粉末适量（约相当于阿托伐他汀10mg），置100ml量瓶中，加混合溶剂适量，充分振摇使溶解后，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀即得。 　　3 结果 　　3.1 专属性试验 　　取阿托伐他汀对照品与杂质对照品适量，精密称定，配成含阿托伐他汀100μg/ml与各个杂质10μg/ml的混合溶液， 进样， 阿托伐他汀与各杂质间分离良好。取阿托伐他汀对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，对阿托伐他汀分别进行酸、碱、氧化、热及光照破坏试验， 分别加入1mol/L盐酸适量，1mol/L氢氧化钠适量，30%双氧水适量，冷却到室温，调节pH至中性，直火烧至熔融，在4500lx光照条件暴露24h后，用稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液20μl进样，记录色谱图。阿托伐他汀在不同条件下均有不同程度的降解，主成分峰与降解杂质峰分离良好。 　　3.2 线性相关性试验 　　精密称取阿托伐他汀钙杂质F、A、C、H对照品适量，加混合溶剂稀释，配制成浓度约为1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml的标准溶液，精密吸取各标准溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果表明阿托伐他汀钙杂质F、A、C、H分别在浓度范围1.05-4.20μg/ml、1.04-4.16μg/ml、1.13-4.52μg/ml、1.11-4.44μg/ml内呈现良好的线性相关性。 　　3.3 仪器精密度试验 　　精密称取阿托伐他汀钙杂质F、A、C、H对照品，加入混合溶剂稀释，使浓度分别约为1.5μg/ml、1.5μ