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正交试验优化稳心草总黄酮提取工艺 　　摘 要：以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定总黄酮含量。通过L9（34）正交试验优选稳心草总黄酮提取工艺条件。结果显示，芦丁浓度在0.008～0.048 mg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系（r=0.9999）；结合正交试验结果和方差分析，确定最佳提取工艺为物料比1∶10，65%乙醇提取2次，2h/次。 　　关键词：正交试验 稳心草 总黄酮 提取工艺 　　中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）08（a）-0192-02 　　稳心草为金丝桃科金丝桃属植物乌腺金丝桃干燥全草或地上部分，主产于黑龙江省大兴安岭地区，具有止血、镇痛、通乳功效[1]。北方习称稳心草，长期以来为民间常用草药，国内外对其化学成分、药理作用研究较少，经文献检索，其主要成分为黄酮类化合物[2]，以总黄酮得率为指标，通过正交实验考察了乙醇浓度、乙醇体积、提取时间和提取次数4个对提取因素的影响，确定了稳心草总黄酮的最佳提取工艺。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料与试剂 　　稳心草，产地大兴安岭地区，由大兴安岭林科所刘光研究员鉴定为金丝桃科金丝桃属植物乌腺金丝桃干燥全草，芦丁对照品，实验所用试剂均为AR，水为蒸馏水。 　　1.2 仪器 　　电子天平（上海越平科学仪器有限公司），754型紫外分光光度计（上海现科分光仪器有限公司）。 　　2 方法与结果 　　2.1 标准曲线的制备 　　精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品20 mg，置50 mL量瓶中，加60%乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀。精密量取25 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，6 mL，分别置25 mL量瓶中，各加30%乙醇至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min。加4%氢氧化钠试液10 mL，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在500 nm的波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。得线性回归方程为：A=10.85C-0.0061，r=0.9999，线性范围：0.008～0.048 mg/mL。 　　2.2 样品溶液的制备及测定 　　精密称取稳心草粉2 g，共9份，按正交实验设计回流提取，过滤，合并滤液，浓缩，用60%乙醇转移至50 mL容量瓶并稀释至刻度，再精密量取2～25 mL容量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，滤过，作为样品溶液。精密吸取3 mL不同提取条件下的样品溶液至25 mL容量瓶中，按“2.1.1”项测定，并用回归方程计算总黄酮含量。 　　2.3 正交试验设计 　　选择乙醇-水为提取溶剂，以乙醇浓度、物料比、提取时间和提取次数为考察因素，每个因素取3个水平（见表1），以总黄酮得率为考察指标，进行正交实验。 　　2.4 结果分析 　　根据正交试验分析，由极差值R可知对提取率影响大小因素为：BCAD，理论最佳提取工艺为：A3B2C3D3，应用方差分析（见表3），乙醇浓度F值61.97，大于19，P0.05，乙醇浓度对提取率影响显著，其他因素影响不显著，为次要因素。 　　3 结果与讨论 　　经过正交试验结果分析，稳心草总黄酮的提取最佳工艺为A3B2C3D3，即用物料比1∶12，65%乙醇提取3次，3 h/次。另从方差分析结果可见，提取工艺影响因素的大小顺序为BCAD，综合各项指标，我们优选A2B2C2D2，即物料比1∶10，65%乙醇提取2次、2 h/次为最佳操作工艺。经实验验证，在此最佳工艺条件下，稳心草总黄酮得率为12.03%。 　　稳心草应粉碎为粗粉，粒度过小引起提取杂质增多，同时过滤困难，粒度过大提取不充分。提取温度以提取充分，不超高80 ℃，温度过高会破坏稳心草黄酮结构，温度过低提取不充分。乙醇浓度是影响提取率的主要因素，浓度过低会溶出大量多糖杂质，粘度增加，过滤困难，浓度过高黄酮提取率下降。 　　参考文献 　　[1] 孙明学.大兴安岭森林植物[M].哈尔滨：东北林业大学出版社，2005：428. 　　[2] 顾丽贞，张宏彬.稳心草化学成分研究[J].植物学报，1980，22（2）：151. 4