溃疡性结肠炎患者免疫紊乱分析及综合护理效果的研究.docVIP

溃疡性结肠炎患者免疫紊乱分析及综合护理效果的研究 　　【摘 要】目的：分析溃疡性结肠炎患者外周血中T细胞亚群数量和比例的变化，观察综合护理模式对其疗效的作用。方法：选择20例UC患者，分离外周血单核细胞（PBMC），采用流式细胞术（FCM）检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值，ELISA法测检UC患者综合护护理前后PBMC培养上清中IFN-γ、IL-17、IL-4细胞因子水平，用采用综合护理模式观察其效果， 与同期选择的健康对照组比较分析。结果：UC患者综合护理前PBMC中IFN-γ+Th1、IL-17+Th17细胞的数量，Th1/Th2比值均高于健康对照组，差别有统计学意义；综合护理处理后，Th1、Th17细胞的数量及Th1/Th2比值的与对照组比较，差别均无统计学意义。综合护理处理前IFN-γ、IL-17水平高于健康对照组，差异均有统计学意义；综合护理处理后， 细胞因子的差异均无统计学意义。结论：UC患者外周血免疫紊乱在其发病机制中发挥重要作用，采用综合护理模式可改善其免疫紊乱状态，有利于患者恢复健康。 　　【关键词】溃疡性结肠炎；免疫紊乱；综合护理 　　【中图分类号】R574 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）11-0780-02 　　溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）是一种病因未明的免疫性疾病。近年来研究表明UC患者T细胞免疫失衡与其发病机制密切相关 [1-2]，但其临床治疗效果不佳，常常影响患者的生活质量。本研究将检测患者外周血的T细胞亚群的表达和相应的细胞因子水平， 并运用综合护理模式处理UC患者，为UC患者的临床康复寻找新的具有临床意义的方法。 　　1 材料和方法 　　1.1 临床资料 20例溃疡性结肠炎患者取自本院总部，男12例，女8例，年龄21～64岁，中位年龄35岁，均符合UC诊断标准[3]，20例UC病例组，采用综合护理措施处理10个月以上；正常对照20例取自本院体检部，为健康人群，排除UC及其它自身免疫性疾病，其中男11例，女9例，年龄25～61岁，中位年龄33岁。 　　1.2 检测仪器与试剂 小鼠抗人CD4单克隆抗体IgG1、FITC-抗人IFN-γIgG1/PE-抗人IL-4及同型对照、流式细胞仪均购自美国BD公司。FITC-抗人IL-17及同型对照IgG1购自美国Ebioscience公司。佛波酯（PMA）、离子霉素、莫能菌素购自美国Sigma公司， RPMI1640培养液购自美国Gibco公司。抗人IL-4 ELISA试剂盒、 抗人IFN-γ ELISA试剂盒购于美国RD公司。抗人IL-17 ELISA试剂盒购于美国Ebioscience公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 淋巴细胞分离与 Th细胞亚群测定 分别抽取UC患者组、综合护理处理组和健康对照组外周静脉血5 mL， 采用肝素钠抗凝， Ficol1密度梯度离心法分离PBMC， 调整PBMC密度为1×109/L， 悬浮于含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中，同步取1 mL细胞悬液， 进行细胞内细胞因子染色，FCM测定Th细胞亚群；取2 mL细胞悬液加入PMA（50 μg/L）、离子霉素（1 μmol/L）置于37℃孵箱中培养过夜， 收集上清置于-70℃冻存待ELISA检测。 取上述PBMC悬液（1×109/L）置于48孔培养板内， 每孔1 mL， 并加PMA （50 μg/L）、离子霉素（1 μmol/L）和蛋白转运抑制剂莫能菌素（2 μmol/L）以阻止细胞因子向细胞外分泌， 在37℃孵箱中培养5 h。收集细胞分为对照管和实验管， 分别加入PercP小鼠抗人CD4 mAb IgG1 10 μL， 混匀， 室温放置20 min对细胞表面抗原进行染色。加入Cytofix/Cytoperm液200 μL，4℃放置20 min， 通透和固定细胞并洗涤后， 进行胞内细胞因子染色， 实验管分别加入IFN-γ mAb IgG1/PE，抗人IL-4 /FITC， FITC抗人IL-17 mAb IgG1各10 uL， 对照管加入同型对照抗体， 4℃避光孵育30 min后， 用Perm/Wash液1 mL洗涤2次， 最后以300 μL洗涤液重悬细胞，24 h内采用FCM检测分析。以CD4直方图设门区分Th细胞（CD4+）， 最终以散点图IFN-γ、 IL-4和IL-17染色阳性表示Th1细胞、 Th2细胞和Th17细胞， 用Cellsquest软件获取并分析数据。 　　1.3.3 外周血单核细胞培养上清中IFN-γ、 IL-4、 IL-17的检测 取上述冻存PBMC培养上清， 采用ELISA法检测上清中IFN-γ、IL-4、IL-17水平