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hTERTmRNA在胃癌中表达及其与预后的关系 　　[摘要] 目的 了解人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在胃癌中的表达情况及其与胃癌侵袭、转移和预后的相关性。 方法 以52例胃癌患者为研究对象，应用RT-PCR技术检测hTERT mRNA在胃原发癌、癌旁正常胃黏膜及淋巴结转移癌中的表达，并对所有病例进行随访，分析其与胃癌侵袭、转移和预后的相关性。 结果 hTERT mRNA在胃原发癌和淋巴结转移癌中表达明显增高，而在癌旁正常胃黏膜中表达极低或不表达，差异有统计学意义（P20 cm2、淋巴结分期（7th TNM分期）晚者（N3）中明显增高（P0.01）。hTERT mRNA高表达组患者5年生存率为17.41%，低表达组为60.04%，差异有统计学意义（χ2=14.20，P=0.0002）。 结论 胃癌原发灶中hTERT mRNA表达与其恶性生物学行为有关，是反映其侵袭、转移和预后较好的分子指标。 　　[关键词] 胃癌；人端粒酶逆转录酶；侵袭；转移；预后 　　[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（b）-0004-03 　　胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，就诊患者中约90%为进展期胃癌，极易发生侵袭、转移，预后差，严重威胁着人们的身体健康。探讨胃癌侵袭转移的分子机制，寻找与其相关的生物学标志物是当今肿瘤学研究的热点之一[1]。端粒酶是一种与细胞永生化和肿瘤形成相关的核糖核蛋白酶，它能够以细胞内部的一段RNA为模板合成端粒末端重复序列而延长端粒，从而使细胞永生化。人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）是人类端粒酶的催化亚单位，是端粒酶活性高低的限速酶。hTERT的表达与端粒酶活性呈正相关，可以反映端粒酶活性的高低[2-4]。研究已证实，端粒、hTERT与正常细胞生长调控及恶性肿瘤之间密切相关。目前有关hTERT在胃癌中的研究多集中在胃癌发生的始动阶段，hTERT高表达可促进胃癌的发生[5]。然而，hTERT与胃癌侵袭、转移及预后的关系研究相对较少。本研究选取52例胃癌患者为研究对象，应用RT-PCR方法检测hTERT mRNA在同一患者的正常胃黏膜、胃癌原发灶及转移灶（即转移淋巴结）中的表达，通过随访，系统研究hTERT mRNA在胃癌中的表达情况及其与胃癌恶性生物学行为和预后的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　以2001年9月～2002年9月中国医科大学附属第一医院肿瘤外科52例胃癌患者为研究对象，收集患者新鲜大体组织标本。在手术切除胃癌大体标本30 min内，切取胃原发癌灶和正常胃黏膜及转移淋巴结，放入消毒灭菌的EP管中，于液氮中速冻0.5 h后转入-70℃冰箱中冻存等待检测，以上标本均经病理证实，并保留其石蜡标本。对52例患者进行随访，主要通过门诊复查、电话信函问询、派出所户籍查询等，随访终点为2010年9月，随访率为100%，随访时间为8～106个月，平均48.5个月。 　　1.2 RT-PCR检测hTERT mRNA的表达 　　严格按照TRIzol试剂盒说明书进行操作，提取所有新鲜大体标本总RNA，测定其OD260、OD280值，对总RNA进行定量；应用RNA琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。取高质量总RNA 1 μg进行逆转录合成第一链cDNA，然后取3 μl cDNA水溶液进行PCR扩增，具体条件：94℃ 5 min，94℃ 40 s、58℃ 45 s、72℃ 60 s（30个循环），72℃ 7 min。hTERT基因引物序列为：5′-CGTCCAGACTCCGCTTCAT-3′，5′-TGCTTCTTGTGGTCCTCAGA-3′，产物为340 bp；内参基因GAPDH引物序列为：5′-AGGGGTCTACATGGCAACTG-3′，5′-CGACCACTTTGTCAAGCTCA-3′，产物为227 bp。扩增产物经梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色检测，详细步骤参见文献[6]。用Fluorchem V2.0 Stand Alone电泳凝胶扫描仪对电泳凝胶进行扫描，应用其自带的分析软件进行灰度（A）测定，电泳中有扩增产物条带者为阳性，无扩增产物条带者为阴性；计算hTERT mRNA表达指数（ImRNA），I=A（hTERT）/A（GAPDH），ImRNA与其在组织中的表达量呈正比。 　　1.3 统计学方法 　　应用SPSS 19.0统计软件分析数据，应用配对均数t检验比较hTERT mRNA在胃原发癌灶、正常胃黏膜、淋巴结转移癌中表达的差异；应用单因素方差分析评估其在胃原发癌中表达与胃癌生物学行为的相关性；应用Kaplan Meier分析绘