高脂诱导的非酒精性脂肪性肝病伴胰岛素抵抗大鼠模型建立方法.docVIP

高脂诱导的非酒精性脂肪性肝病伴胰岛素抵抗大鼠模型建立方法 　　[摘要] 目的 建立一种简单易行且符合人类疾病特征的大鼠非酒精性脂肪性肝病伴胰岛素抵抗动物模型。 方法 将18只SD大鼠随机分为两组，正常对照组大鼠给予基础饲料喂养，模型组给予高脂饲料及18%蔗糖水喂养；观察并记录两组大鼠的一般情况及体重变化，12周后取材检测大鼠的血清血脂、血糖、胰岛素、转氨酶，检测肝脂、丙二醛、肝脏HE染色病理学指标。 结果 模型组大鼠的血脂、肝指数、肝脂、胰岛素抵抗指数明显高于正常组，病理学检查提示模型组大鼠肝组织呈脂肪变和炎性变。 结论 科学比例的高脂配方可以成功诱导建立非酒精性脂肪性肝病伴胰岛素抵抗大鼠模型。 　　[关键词] 非酒精性脂肪性肝病；大鼠模型；胰岛素抵抗；高脂配方 　　[中图分类号] R-05 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）10（b）-0006-03 　　非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是病理组织学改变与酒精肝相似，具有脂肪变性、肝细胞损伤及炎症细胞浸润，但无过量饮酒史的一种慢性疾病[1]。研究表明，在普通人群中NAFLD的发病率为6%～14%[2]，有研究认为，胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）是NAFLD发生发展的主要基础之一[3]。尽管近年来国内外对NAFLD开展了很多基础和临床研究，但是NAFLD的发病机制至今尚未完全阐明，治疗上亦缺乏有效手段。因此，建立与人类NAFLD发病相近的动物模型，进一步开展基础研究，探索其发病机制，寻找有效的防治手段显得尤为重要。本实验通过高脂饮食和高蔗糖水喂养，建立了较为理想的符合人类NAFLD发病机制的NAFLD伴IR大鼠模型，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　大鼠血清胰岛素，丙二醛（MDA），血清丙氨酸转移酶（ALT）检测试剂盒（Cayman，美国）。大鼠血清糖、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）试剂盒（Biosino，中国）。复合维生素（进口药品注册证号、复合矿物质、酪蛋白。 　　1.2 方法 　　1.2.1 NAFLD模型的建立 SPF级雄性SD大鼠16只，购于广东省实验动物中心[批号：SCXK（粤）2008-0002]，体重（200±20） g，经适应性喂养1周后，随机分为两组，每组8只。将大鼠饲养于新兴中药学校动物中心，每笼4～5只，保持20～22℃恒温，12 h光照和黑夜循环。正常对照组给予基础饲料喂养（D12450B配方饲料，脂肪提供热量占10%），模型组给予高脂饲料喂养（D12492配方饲料，脂肪提供热量占60%），持续12周[4-5]。期间两组大鼠均自由饮用蒸馏水，同时模型组大鼠自由饮用18%蔗糖水。基础和高脂饲料配方见表1。 　　1.2.2 标本收集及保存 大鼠实验前禁食过夜，自由饮水。称重后采用3%戊巴比妥1.5 mg/kg体重腹腔内注射麻醉，腹部正中大十字切口进腹，游离肝脏，自腹主动脉采血4～5 ml，37℃恒温60 min，1500 r/min离心5 min，取上清置于离心管分装保存于-20℃冰箱中。在大鼠抽血后仍存活状态下迅速切下肝脏，从肝右叶切除1 cm×2 cm大小肝组织，置于10%甲醛溶液中固定，进行常规病理学检查；取一部分组织保存于-80℃冰箱中以备肝脂、肝组织MDA的检测。 　　1.2.3 主要检测指标 ①观察大鼠的食欲行为、状态、毛发情况；②肝湿重、体重及肝指数的检测，肝指数=肝湿重/体重×100%；③血清、肝组织生化以及血清细胞因子的检测，血脂（TC、TG）、血糖、血ALT以及肝组织MDA水平的检测根据相应试剂盒说明书进行，HOMA指数=血糖×胰岛素/22.5；④HE染色。 　　1.3 统计学处理 　　所得数据采用SPSS 17.0 for Windows软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析（One way ANOVA），以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 两组大鼠的一般情况 　　实验过程中，正常组大鼠毛发光泽，体态活泼，反应敏捷，食量、排泄物均正常。模型大鼠毛发欠光泽，活动减少，粪便时稀软。 　　2.2 大鼠肝湿重、肝指数、血脂和IR的情况 　　与正常对照组大鼠相比，12周高脂饮食的模型组大鼠体重、肝湿重以及肝指数显著增加（P0.05或P0.01）；模型组大鼠血脂（TC、TG）、肝脂（肝TG）以及肝组织MDA水平与对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）；与正常组比较，模型组大鼠血糖和胰岛素水平以及HOMA指数明显增加（P0.05或P0.01），提示高脂饮食可以造成大鼠糖、脂