假性甲狀旁腺功能减退家系致病位点筛查及GNAS基因c.952 TC 对Gas功能的影响.docVIP

青岛大学 硕士学位论文 假性甲状旁腺功能减退家系致病位点筛查及GNAS基因c.952 TC 对Gas功能的影响 姓名：王灿 申请学位级别：硕士 专业：内分泌与代谢病 指导教师：苗志敏  摘要 方法：对患者及其家属进行甲状旁腺素、促甲状腺激素，促性腺激素，雌二醇及 血钙磷等检测。用?对引物对病人及其家系??基因进行外显子及外显子内含子 交界区扩增与测序，发现???????９郝蛏鲈郼???梅直鸫?蠿?? ???．?一?昧?用噶?樱?菇℅???????野生型载体，定点突 变获得?? ?? 果显示载体构建成功，野生型与突变型仅存在??? ?? 细胞有所增加??．????同源建模结果提示：该突变位于基因保守区，其改变 起，体外实验证实该突变可以引起??δ芟陆担??霉δ芟陆悼赡苁怯捎贕?与  ??? ????籱 ??????????? ????琧????? ???????????????? ?? ? ? ?? ? ? ?? ? ?? ?? ??????，?????????琣? ???? ??? ?? ????．???????? ????? ? ????????? ? ??? ?????? ?? ??一?? ?? ??? ???? ????????． ?? ?????琣?????? ? ????? ?? ? ??? ????? ????????猦???????? ?? ?????? ? ??? ?? ?? ?? ?????，?? ??????籺? ???????????? ??????????? ?????? ??? ?????? ? ???? ??? ????． ??? ?? ??? ?? ? ? ??? ????? ????，?? ??? ?? ????????????：??  青岛人学医学院硕上论文 假性甲状旁腺功能减退???且园凶橹?訮?不敏感为代表的一系列综合症。 ?型不具有明确的遗传和家族基础，仅表现为??后通路障碍，??生 成不受抑制?！６?俅采铣＜?腜?亚型有三种??????假假性甲状旁腺功 父方及母方来源的??基因均表达，在???颊咧校?庑┳橹疓?的功能仅下 降约??旧??饕J且蛭U庑┳橹?心阜降腉? ??及蛋白的表达减少所致，有动  ??基闪榆测 ??病人基本情况描述 病例，女，?岁，山东省高密市人，工人。因月经稀少并甲减于????? ??? ? ? ? ?，至此次就诊一直 用药，??一?—?复查甲功?：?? ? 患者的母亲：圆脸，身高?????逯刂甘?????／??琗线显示其跖趾 骨发育异常???，?。  青岛人学医学院硕‘上论文 第二节??基因检测 ??酆厦讣捌浞从μ逑????? ????狿?电泳仪  绢人情况???基因检测 ??．?呀夂煜赴?嚎鼓?????血，??鼓??加入??塑料离心管中， ??．?呀獍紫赴?杭尤??核悬液，轻轻混匀，加入???。?と鹊????， 钟，将上清液移入另一??离心管中。 ??．?蛏鲜錾锨逯屑尤?／?体积?话阍?．??的?醋酸钠溶液?。?だ? 在离心机上????离心?种樱??掖迹?贸恋碜匀桓稍铮?缓蠹尤??? ? 溶解。 ??共有?个外显子，到目前为止，每一个外显子上均有突变位点发现，因此我 们扩增包括富含?的第一外显子在内的所有外显子序列及内含子外显子交界区做 定。 ?????????? ??????????  青岛大学医学院硕上论文 ?????????? ?? ???啊玊?????? ?? ?????????? ?????????? ??? ??? 上游引物： 下游引物： ?×???： ??： ??? ? ? ??? ??? ?? ? 结果解释：患者的姐姐及父亲??  病人情况与??基冈检测 第二章生物信息技术的应用 第一节??基因???保守性分析 ??褂玫娜砑?篊??? ??峁?馐图肮δ茉げ猓河赏?可见在人、大鼠、小鼠、野猪等物种中?? ??? 高度保守，??????餑? 可以推测，该错意突变可能会导致蛋白功能的改变。 第二节同源建模及功能预测 载最相近的蛋白??袷轿募??赗???姓页鯣? 文献找出该位置所对应的功能，由此预测蛋白功能的改变通过何种机制引起。 ??嗷プ饔么佣?跋霨?蛋白的信号传导功能，但具 体的机制尚需进一步研究。 ?  青岛大学医学院硕士论文 第三章??野生型及突变型功能检测 第一节载体构建 ? ??定点突变试剂盒?????? ??????型高通量????? ???一??妥贤夥止夤舛燃?????? ??????目的片段的获取 携带的酶切位点如下：  ?? ????? ? ?? ? ?? ? ?? ? ①?℃ ?? 薹? ? ? 籭? ? ??