第11章 遗传病的诊断修改【参考】.pptVIP

（三）基因诊断在遗传病诊断中的应用 1.对单基因病的基因诊断 （1）点突变型遗传病的基因诊断 ①镰状细胞性贫血的基因诊断 镰状细胞贫血(HbS)： 第5～7位密码子 MstⅡ： CCTNAGG ?A： CCTGAGGAG ?S： CCTGTGGAG ?A?A ?A?S ?S?S 1.2 Kb 0.2Kb 1.40 Kb 1.20 Kb 0.20 Kb ASO Hybridization PKU, AR Normal probe Mutation probe ②无过氧化氢酶血症（acatalasemia) 是一种常染色体隐性遗传病，患者过氧化氢酶活性只有正常人的0.2%～0.4%，杂合体血液中过氧化氢酶活性则处于中间水平。过氧化氢酶基因由13个外显子和12个内含子组成。 应用32P标记PCR反应中底物 方法，扩增第4个外显子和内 含子附近的203bp片段，应用 SSCP法可清楚地判断患者和 杂合体。 PCR-SSCP法检测 无过氧化氢酶血症 aa/aa aa/- aa/a- a-/-- --/- 14kb 10kb 10kb 4kb BamH I BamH I 左侧：16号染色体上携有数目不同的基因 右侧：a基因探针杂交的结果 1) ?-地贫基因缺失的诊断 正常 贫血 症状 携带者 HbH （2）基因缺失型遗传病的诊断 2) DMD／BMD的缺失型诊断： DMD基因缺失的多重PCR Prn.启动子；1.正常，九条带；2.基因全缺失；3.启动子区缺失； 4.第3外显子缺失；5.第13外显子缺失；6.第47外显子缺失； 7.47～52外显子区段缺失；8.第52外显子缺失 （3）基因异常不明的遗传病的诊断 以苯丙酮尿症( PKU )的基因诊断为例。 RFLP分析： PAH基因SphⅠ切点 SphⅠ酶对PKU的RFLP分析 示意图 A.系谱；B.RFLP图 一个PKU家系的RFLP单体型分析 DMD家系 单体型 分析图解 单体型分析 PKU，AR 1 2 Ⅰ Ⅱ 1 2 3 5.6 Kb 5.2 Kb 4.2 Kb 4.0 Kb Hind Ⅲ SphⅠ 11.0 Kb 9.7 Kb 7.0 Kb PKU家系PAH基因STR连锁分析 2.多基因遗传病的基因诊断 人类基因组多态性是多基因病基因诊断的基础，易感基因多态性的检测能帮助我们理解多基因病发生的机制，有助于对疾病的诊断和分类。 目前已经发现一些多基因病相关基因，如载脂蛋白E基因（ApoE）的多态性与阿尔茨海默病（AD）有高度相关性，血管紧张肽转换酶基因的多态性与原发性高血压和心肌梗死高度相关。 （1）ras基因突变的检测 ras基因突变的检测可采用PCR-ASO方法进行，已知ras基因突变的热点在12、13及61密码子。 （2）p53基因的检测 目前常用PCR法进行检测p53突变的热点是外显子5～8，一般可先选用外显子5～8的引物进行扩增，其后再进行突变位点的详尽分析，甚至测序。另一初步检测p53基因突变的方法为PCR-SSCP，然后测序。 3.对肿瘤的基因诊断 （四）基因诊断的意义： 1. 现症患者诊断：争取有效、针对性治疗。 2. 产前诊断：意义更为重要，预防遗传病 患儿的出生。 未来的基因诊断主要发展方向： (1)胚胎着床前诊断——在囊胚8个细胞期，通过对其中一个细胞的染色体核型分折和原位杂交，从而将人类的遗传缺陷控制在最早期阶段； (2)母体外周血中胎儿细胞分析技术； (3)对常见病、多发病如心血管系统疾病、糖尿病、精神疾病、神经系统疾病、恶性肿瘤、哮喘、近视眼等进行分子诊断。 （五）疾病基因诊断的展望 * -------------------------- 第三节 产前诊断 （prenatal diagnosis） 产前诊断又称宫内诊断（intrauterine diagnosis）是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作出准确的诊断。 一、产前诊断的适应征 1．35岁以上的高龄孕妇或夫妇一方有明显致畸因素接触史； 2．夫妇之一有染色体数目或结构异常者；或曾生育过染色体病患儿的孕妇； 3．已知或推测孕妇是AR或XR携带者；曾生育过某种单基