第十三章 骨代谢异常的生物化学诊断（参考）.pptVIP

l）邻甲酚酞络合酮(CPC)是一金属复合染料，与钙在pH约1.2的碱性溶液中形成紫红色螯合物 ，570~580 nm波长测定吸光值定量钙浓度 。用 8~羟基喹啉消除Mg2+干扰。加入氰化钾可稳定反应以及避免其他重金属的干扰 。钙与CPC按 1:1和 2:1两种比例结合，1:1复合物在低浓度时占优势，校正曲线在低浓度是非线性的。因此，CPC法推荐用多点校正。反应对温度很敏感，应严格控制反应温度。2）偶氮砷Ⅲ是一种钙结合试剂 ， 对钙有高而特异的亲和力 。在弱酸中(pH 6)，该染料与钙的亲和力比镁高 ， 可形成蓝紫色复合物 ，在650－660ｎrn测定其吸光度定量。 返回 　　游离钙测定方法为离子选择电极法，分析仪器在微处理器控制下，自动传送校正液、样品和清洗液进入分析室，分析室中含有钙离子选择电极. 参比电极和pH电极。敏感的电位仪测定钙. 参比、pH电极之间的电位差。仪器同时分析37℃时实际游离钙 和pH，然后计算pH7.4时的游离钙。 返回 　　现在血清磷测定实际上检测的是血清中的无机磷酸根。7H3PO4+12(NH4)6Mo7O24·4H2O→7(NH4)3[PO4(MoO3)12]+51NH4++51OH－+33H2O　　无色的磷铝酸盐复合物可直接在340nm波长测定其紫外吸光值，或进一步用还原剂还原后产生钼蓝，在600~700nm波长测定。 返回 　　血清镁仅占总体镁的1%，其中55%是游离的，约30%与蛋白(主要是清蛋白)结合，15%与磷酸盐、枸橼酸盐及其他阴离子复合。　　血清总镁的测定方法包括分光光度法,AAS,沉淀法,、滴定法、荧光法以及火焰光度法.虽然AAS为参考方法 ， 但且前临床实验室最普遍使用的是分光光度法。 返回 下一页 (1)分光光度法；许多金属色原指示剂或染料可选择性结合镁发生颜色改变。目前常用的有钙镁试剂、甲基麝香草酚蓝等显色剂。1）钙镁试剂：钙镁试剂是一种金属色原指示剂，在碱性溶液中与镁结合形成紫色复合物，可在530－550nm波长检测。加人钙螫合剂EGTA可减少钙的干扰 ，加入氰化钾可避免形成重金属复合物 ，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及表面活性剂可减少蛋白质及脂血的干扰。2）甲基麝香草酚蓝与镁形成蓝色复合物，在600nm左右测定，加入EGTA可减少钙的干扰。 返回 下一页 上一页 (2)原子吸收分光光度法(AAS):27Mg中子活化法是镁测定的确定性方法，临床实验室用AAS作为参考方法，虽然AAS准确和精确，但难以在大多数临床实验室推广。　　血清镁被镧~盐酸溶液按1：50稀释 → 乙炔火焰 → 基态镁原子吸收来自镁空心阴极灯的 285.2nm光波 → 用光电管或检测器在285.2nm测定镁的吸光值。 返回 上一页 　　临床实验室测定血浆(清)游离镁主要是离子选择电极法 ， 选择电极带有一个中性离子载体ETH5220、ETH7025等 。现使用的离子载体或电极对镁的选择性不如钙 ， 干扰主要来自游离钙。 返回 返回 　　采用竞争性放射免疫法，125Ｉ标记PTH片段与病人样本中PTH片段竞争抗体结合位点。经温育，沉淀，计数结合的放射性强度。用同样处理的标准品制作标准曲线，从曲线中可得到病人PTH浓度。 返回 免疫化学发光法（ICMA）包括： ①用固定的 抗~hPTH(1~44)、抗~hPTH（44－68） 抗体和发光剂丫啶酯标记的抗~hPTH （1－3４）三种抗体，同时测定中段和 N － 端片段的多位点免疫化学发光法。②血清中段PTH自动化ICMA检测法，该法简便快速 ，无放射性 ，并且不受其他相关片段干扰。 返回 　　 目前用于测定维生素D活性形式 25(OH)D３ 和 1，25(OH)2D３ 出的方法有：放射竞争性结合法（CPB）、放射受体测定法（RRA）、放射免疫法（RIA）和高效液相色谱法（HPLC）。由于1，2525（ＯＨ）２Ｄ３是血清中维生素D的主要活性形式，故是反映维生素D状况的最佳指标。 返回 过去，血清降钙素测定都采用RIA法，但其结果受不同来源抗血清的影响 灵敏度和特异性不同 ，不同方法和试剂盒间差异较大 ，使临床参考值水平在实验室之间难以统一 。现建立了一种高灵敏的两点免疫法(EIA和IRMA)，测出正常人降钙素的基础水平低于 10~20ng／L，其检出限可小于2ng／L。两点法在诊断甲状腺髓样癌（MIC）要比大多数竞争性RIA显现出良好的灵敏度和特异性。 返回 　已有多种竞争性免疫法用于测定HHM病人血清中PTHrP， 如N~末端(1~34)、中间段 (37~67，37~74) 以及 C~末端。其中N~末端使用较多。固定抗PTHrP抗体的亲和色谱法 、反相色谱法，以及纯化技术已用于改善 PTHrP的灵敏度和特异性 。更敏感和特异的两点