【2017年整理】分子生物学复习提纲答案.doc

PAGE PAGE 5分子生物学复习提纲（个人答案，仅供参考）名词解释同源染色体：二倍体细胞中染色体以成对的方式存在, 一条来自父本，一条来自母本，且形态、大小相同，并在减数分裂前期相互配对的染色体。含相似的遗传信息。限制性片段长度多态性：用限制酶切割来源不同的DNA，可以得到不同长度的DNA片段，称为限制性片段。当用特别的探针与这些DNA片段杂交时，发现同一物种不同个体DNA的杂交信号有所不同，这种技术就是限制性片段长度多态性技术。表达序列标记（EST）：从cDNA文库随机取样进行测序，在基因组中定位，作为表达基因的位标。这样的位标称为表达序列标记。转录图谱就是以EST作为位标的基因组图，又称cDNA图或表达序列图。引物：DNA聚合酶不能从无到有地合成DNA链，只能把脱氧核苷酸连接在已有核酸的3’-羟基上，而且该核酸的序列必须与DNA模板的3’端序列互补，并形成结合，这已有的核酸就是引物。核酸分子杂交：异源互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子的过程称为分子杂交。可分为液相杂交和固相杂交两种。限制性内切酶：是一种内切核酸酶，由细菌产生，能识别双链DNA的特定序列（限制位点），并水解该序列内部或附近的磷酸二酯键。可分为三类：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型限制酶，其中Ⅱ型限制位点和切割位点都确定。探针：是指用以与待测核酸进行杂交的已知序列的标记核酸片段。细胞周期：是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂开始的时间叫细胞分裂间期。Southern blotting：即DNA印迹法，将通过凝胶电泳分离的待测核酸转移并结合到固相支持物上，然后与探针进行杂交并分析。Western blotting：即蛋白质印迹法，它和DNA印迹法、RNA印迹法类似，由电泳分离、转移固定和检测分析等组成。用它既可以鉴定一个蛋白质样品中的目的蛋白，也可以检测一种目的蛋白在不同组织细胞内的相对含量。单基因疾病：是由单一基因突变引起的疾病，属于孟德尔遗传病，常见病有血友病A和假肥大型肌营养不良症。原癌基因：又称细胞癌基因，是存在于细胞基因组中的一种正常基因，其功能是控制细胞生长和分化。原癌基因是病毒癌基因的同源序列。原癌基因受物理、化学或微生物等因素的作用，发生突变或扩增等，激活成为癌基因。癌基因：是原癌基因的突变体，其编码产物可以使培养细胞发生转化，或在动物体内诱发肿瘤。抑癌基因：是一类存在于正常细胞内、调控细胞生长的基因，具有潜在抑癌作用。如果这类基因发生突变而失活，可以引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。基因芯片技术：将大量寡核苷酸分子作为探针，固定于较小的支持物表面，然后与标记好的待测核酸样品进行杂交，再检测杂交信号的强弱，从而判断样品中待测核酸的数量或活性状态。问答题一、简述PCR引物设计原则引物长度合适——不小于15nt，一般为15~30nt。引物碱基的组成和分布具有随机性——要避免嘌呤或嘧啶碱基含量过高或集中排列。引物的碱基组成基本一致——碱基组成影响退火温度，两个引物的碱基组成一致，可以应用相同的退火温度，确保PCR的成功。引物内部避免形成二级结构——不超过3bp。引物之间没有互补性——会造成引物之间退火，发生引物扩增，降低扩增效率。引物的3’端最好是G/C引物的5’端可以修饰——即使不互补，也基本不影响PCR的特异性。引物严格特异引物的浓度合适引物的质量好印迹杂交过程：样品制备—电泳分离—印迹—预杂交—杂交—洗膜—分析二、试述DNA印迹法的原理、操作过程及其应用原理：将通过凝胶电泳分离的待测核酸转移并结合到固相支持物上，然后与探针进行杂交并分析。过程：1、提取DNA、用限制酶切割，获得DNA片段混合物。2、琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段3、用碱处理电泳凝胶，将DNA片段原位变性解链。4、将变性的DNA片段从凝胶转移到固相膜上。5、用封闭物预杂交，然后漂洗除去未结合封闭物。6、用探针杂交液浸泡固相膜，与待测DNA片段进行杂交。7、用不同离子强度的溶液依次漂洗固相膜，除去未杂交探针和形成非特异性杂交体的探针。8、通过显影或显色分析固相膜上的杂交体，将杂交体位置和凝胶电泳图谱进行对比，可计算待测DNA片段的分子量。应用：检出特异的DNA片段，测定分子量，分析DNA限制酶图谱、DNA指纹、基因突变、基因扩增和DNA多态性等。三、根据被测定的对象，简述分子杂交印迹的种类、特点及其应用上优缺点1、DNA印迹法2、RNA印迹法RNase 无处不在，要绝对消除外源RNase的污染。先变性后电泳、转移。不能采用碱变性，只能采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性。可以用于定性或定量分析组织细胞内的总RNA或某一种特异RNA，特别是分析mRNA的长度和含量。3、蛋白质印迹法也