亲和层析的应用[精选].pptVIP

亲和层析的应用 亲和层析 亲和层析（affinity chromatography）是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 亲和层析法具有多方面的应用。 核酸的纯化 因为DNA与RNA之间具有专一性的亲和力，所以亲和层析可应用于核酸的研究，例如从大肠杆菌的RNA混合物中分离出专一于噬菌体T4 的RNA，可将T4的DNA以共价键结方式接于cellulose材质的管柱中，再将所要的RNA分离出。 此外，根据核酸与蛋白质之间交互作用的原理，可以将单股DNA接在Sepharose上，纯化DNA聚合酶或RNA聚合酶。 激素受体的纯化 激素受体是细胞膜上与特定激素结合的成份，激素和受体的作用具有特异性，目前用亲和层析法已经能够将激素与sephrose的组合，纯化胰岛素、正甲状腺素的受体。 抗体与抗原的纯化 抗体与抗原结合具有高度专一性，Sepharose是这一类亲和层析较佳的载体，由于抗原-抗体复合物的解离常数很低，因此抗原在固定化抗体上被吸附后，要尽快将它洗出，冲洗液的条件通常是控制pH值至3以下，成份为醋酸、盐酸、Tris-HCl缓冲液、20% 甲酸或1mol/L 丙酸，也有使用尿素这一类的蛋白质变性剂作为洗出用的溶液。 酶和酶的抑制剂纯化 使用亲和层析法纯化酶，可以得到相当好的效果。例如，要分离猪和牛的胰蛋白酶，可以连接鸡卵黏蛋白（胰