第二章植物组织培养的基本原理要点.ppt

第二章 植物组织培养的基本原理 ★植物细胞全能性（Cellular totipotency）： 任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 （Haberlandt, 1902） 1、细胞全能性（cell totipotency) ：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 细胞全能性（红萝卜） 高等植物细胞分化示意图 1.2 植物细胞的分化与脱分化 1.3.1愈伤组织的诱导与器官分化 一、基本概念 脱分化 ： 具有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，细胞改变原来的分化状态，失去原有的结构与功能，转变为具有分生能力的细胞的过程 。 愈伤组织： 植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经脱分化等一系列过程，转变为分生细胞，进而转变形成一种能够迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团 一般低，植物各器官、组织都有被诱发产生愈伤组织的潜在可能性。 自然条件下的植物愈伤组织 1.3.1愈伤组织的诱导与器官分化 一）、愈伤组织的诱导 诱导愈伤组织的成败关键主要不是实验材料，而是培养条件，其中激素的成分和浓度是最重要的因素。 1、 常用激素与浓度 1）、激素： 多数情况下，单独使用2，4-D可以成功诱导愈伤组织的发生 案例1：MS培养基含有不同浓度2，4-D时斑茅幼叶形成愈伤组织的诱导率（%） 不同浓度的2，4-D对愈伤组织的诱导率是不同的。一般情况下，2，4-D的浓度过低（低于10-9mg/L）时，愈伤组织生长缓慢；浓度过高（高于10 mg/L）时，就会抑制愈伤组织的生长。 二、愈伤组织的形成 愈伤组织从增殖的组织细胞中产生，激素改变细胞的新陈代谢状态，从生长静止期到代谢旺盛。 从外植体脱分化形成愈伤组织大致可分为三个时期：起动期 （诱导期）、分裂期和分化期。 三个时期愈伤组织的代谢状况、结构以及细胞的平均大小都有明显的差别。  （1）诱导期（起动期、或起始期）:  起动期： 细胞准备分裂的时期，愈伤组织形成起点。 外植体细胞在完整植株中随着细胞的分化过程而逐渐停止分裂，开始执行它们各自不同的功能。外植体细胞一般处于静止状态，称为静止细胞。 在外源植物激素的作用下，处于静止状态的植物细胞经过复杂的脱分化过程恢复分裂能力转化为分生细胞。此过程有人称之为：细胞的诱导活化过程。 期，并发生同步分裂。 在诱导期，代谢活化了，细胞内的合成代谢加强，如合成代谢加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。但是细胞的大小仍然和外植体时一样，没有多大改变。 诱导期的长短 由一系列内部（植物的种类、生理状况）和外部（光照、外源激素）因素决定。 例如：菊芋的诱导期有时还不需要1天，胡萝卜则要好几天，而菊芋块茎贮藏时间的改变，诱导期也发生改变。从11月到次年4月取菊芋块茎进行培养，则诱导期从22小时逐渐延长到40小时。 分裂期特征： 生理生化上分裂期的一个明显特征是外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞核和核仁增到最大，RNA含量达到最高等。 此时期的愈伤组织：细胞分裂快，结构疏散，缺少组织的结构，颜色浅而透明。 细胞分裂从分裂期的周缘细胞分裂为主逐渐转向内部的组织细胞，愈伤组织表层细胞分裂减缓或停止，内部深层细胞分裂并形成像维管束或类似于分生组织组成的鸟巢状结构的次生组织。 此时期中细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的平均大小趋于稳定。 生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿色；而老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色。 根据形态变化列出三个时期，实际上它们的界限并不分严格，特别是分裂期和分化期。一块培养组织的细胞既有分裂的又有分化的。 不同植物来源的愈伤组织，在质地、形态和物理性状方面均有明显的差异。有的愈伤组织呈淡黄色或白色，有的愈伤组织呈绿色或红色。 一般来说，来源于相同组织的愈伤组织含有的色素大致相同， 但经过反复继代培养后会失去色素。 根尖愈伤组织 （无色透明） 茎尖愈伤组织 （淡绿色） 当归茎段愈伤组织（绿色） 1.3.1.2 愈伤组织的形态发生 愈伤组织培养物在某些条件下，可以再分化产生不定芽或根的分生组织甚至是胚状体，继之，由这些有结构的组织而发育成苗或完整小植株。 愈伤组织通过再分化形成再生植株的方式主要有三种：1)、先产生芽，后在茎的基部长根；2)先长根，再长芽；3)愈伤组织