第四章 离心技术（参考）.pptVIP

1.固定角式转头  离心管在离心机中放置的位置与旋转轴心形成一个固定的角度,角度变化在14-40°之间。 常见的角度 20° 28° 34° 40? 固定角式转子 角式转头的特点： （1）重心低,转速可较高 （2）样品粒子穿过溶剂层的距离略大于离心管的直径;  （3）“管壁效应” ：有一定的角度, 在离心过程中撞到离心管外壁的粒子沿着管壁滑到管底形成沉淀, 此效应使最后在管底聚成的沉淀较紧密。 设40000rpm时 R1最小、 3.8cm R2平均、 5.9cm R3最大、 8.1cm RCF值分别 67,910g 105,400g 144,700g R1 R2 R3 在离心管的不同部位距旋转中心轴的距离也不同,那么在一定的转速下其RCF值也各不相同 2.水平转头  （1）转子静止时,离心管与旋转轴平行。 （2）转子旋转加速时,离心管由平行位置逐渐过渡到垂直位置,即与旋转轴成90°角, （3）粒子的沉淀方向同旋转半径方向基本一致，几乎没有“管壁效应” 水平转头的特点：（1）转子的重心位置较高 （2）样品粒子沉降穿过溶剂层的距离大于直径（3）对于多种成分样品分离特别有效 （4）常用于速率区带离心和等密度离心 3.垂直转头  离心管垂直插入转子孔内,在离心过程中始终与旋转轴平行,而离心时液层发生90°角的变化,从开始的水平方向改成垂直方向,当转子降速时,垂直分布的液层又逐渐趋向水平,待旋转停止后,液面又完全恢复成水平方向。 离心管主要用聚丙烯塑料和不锈钢制成，塑料离心管的优点是透明，硬度小，可用穿刺法取出梯度。缺点是抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。 不锈钢管强度大，不变形，抗热，抗冻，抗化学腐蚀。但用时也应避免接触强腐蚀性的化学药品，如强酸、强碱等。 塑料离心管都有管盖，离心前管盖必须盖严，倒置不漏液。管盖有三种作用： ①防止样品外泄。 ②防止样品挥发。 ③支持离心管，防止离心管变形。 离 心 管:  根据离心原理,按照实际工作的需要，目前常用的离心方法大致可分成两类: 二、分析离心机（自学） 1、差速离心法 2、密度离心法 第三节离心分离方法 原 理 ：  利用不同的粒子在离心力场中沉降速度的不同,通过不断增加转速（相对离心力）,使各组分粒子分次沉淀。此法也称分级离心法。 操作过程是在离心后把上清液倾倒出与沉淀物分开,然后将上清液加大转速离心,分离出第二部分沉淀物,如此往复加大转速,逐级分离出所需要的物质。 (一) 差速离心法 Differential velocity centrifugation 差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开。 差速离心常用于其他分离手段之前粗制品的提取。 ? 例：用差速离心法分离已破碎的细胞各组份 已破碎的细胞 500g,10分钟   沉淀 上清液 (细胞核） 10,000g,10分钟  沉淀 上清液 (细胞膜碎片,线粒体,溶酶体) 100,000g,3小时   沉淀 上清液 (核蛋白体） (可溶性成份)? (二) 密度离心(isopyniccentrifugation) 1、速率区带离心法 原 理： 先在离心管内分层加好密度梯度介质（不同浓度蔗糖、甘油等）,将待分离的样品加在介质液面上然后进行离心。在离心力作用下，各组分粒子沉降到各密度梯度液相应的位置而彼此被分开,在密度梯度不同的液层内形成系列区带。  原 理：  将样品和预先配制好的密度梯度液（含被分离样品中所有粒子的密度）混合后,加入离心管进行离心，密度梯度液受离心力的作用逐渐形成从管底浓到管口稀的密度梯度,与此同时样品粒子也随之发生位移，最后粒子移动到相等密度的位置不再移动，而彼此被分开。 2、等密梯度离心法 密度离心法注意要点：1、用水平式转头2、粒子密