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实 验 论 文 题 目：盐胁迫对棉花苗期叶片叶绿素含量的影响 姓 名： 郭宁蒙 学 号： 201207040027院 系： 生命科学与农学学院 专 业： 生物技术 年级班级： 2012级生物技术 指导教师： 李艺 2014年12月30日盐胁迫对棉花苗期叶片叶绿素含量的影响摘要：本实验通过研究盐胁迫下中棉12棉花幼苗叶片叶绿素含量的变化，探究盐胁迫对苗期棉花叶绿素含量的影响。关键词中棉12 棉花 苗期 叶绿素引言随着人口的不断增长, 粮食、油料和纤维需求急剧增大, 但是由于全球气候变暖, 水资源短缺等因素导致可耕种土地面积不断减少, 合理有效利用盐碱地能够增加耕地面积, 促进农业生产。盐碱地占全世界土地面积的25%左右, 我国拥有近1亿公顷(王遵亲1993), 改良盐碱地和提高农作物耐盐性是目前开发利用盐碱地的主要手段。棉花(Gossypium hirsutum L.)是一种重要的经济作物, 在国民经济发展中占有重要战略地位( 孙小芳等2000)。虽然棉花有一定的耐盐性, 但盐碱地过高的盐分会直接危害棉花生长, 尤其对棉苗的伤害最为严重(辛承松等2005), 所以研究棉花耐盐机制, 提高棉花耐盐性, 筛选培育适合在盐碱地种植的棉花耐盐品种, 将有助于促进棉花在盐碱地的种植生产。土壤中过量的盐分对棉花造成盐害, 同时会导致棉花我国有部分地区是盐碱地，棉花生长吸水困难，细胞产生高浓度的活性氧物质(ROS), 包括超氧阴离子(O2－· )、过氧化氢(H2O2)和羟基自由基(·OH)等(Meloni等2003)。过量的ROS会降低棉花细胞膜脂流动性、破坏蛋白质功能, 损伤叶绿体造成棉花减产。[1]目前,有关盐胁迫对植物光合作用的影响已有较多报道,盐分处理的植物叶片中Na+和Cl-大量积累,影响了植物对K+、Ca2+和Mg2+的吸收，这种离子吸收的不平衡导致叶绿素降解加快,光系统结构被破坏,相关光合酶活性降低,光合速率下降,其下降程度与植物的耐盐性有关[2].1 材料与仪器供试棉花(Gossypium hirsutum L.)[2]材料为 ‘中棉12’品种,由周口农业科学院提供。实验用仪器主要有:电子天平， 紫外-可见光分光光度计、恒温箱、光照培养箱2实验药品营养液 （ 4mmol/L Ca(NO3)2 、 5 mmol/L KH2PO4 、 2 mmol/LMgSO4 、 1 mmol/L NH4H2PO4 、 0.1 mmol/L EDTA-Fe 0.01 mmol/L MnCl2·4H2O 、 0.001 mmol/L CuSO4 ·5H2O 0.001 mmol/L ZnSO4·7H2O 、 O.O33 mmol/L H3BO3） 50mmol/L NaCl3实验过程取中棉12棉花种子，将种子用蒸馏水浸泡8h，种子浸泡后进行沙培，每个花盆20粒设3个重复。该实验是在人工生长室中进行，温度28/22度，相对湿度28-30％，每天光照时长12小时，光照强度为400μmol/m2s。待萌发出苗，两片子叶展开（约4d）用营养液补充所需营养。待幼苗至两片真叶展开后进行盐胁迫处理，每隔12小时向土中添加50mmol/L NaCl,达到本实验要求的150mmol/L NaCl最终浓度。不再增加盐浓度，盐胁迫14d，测定同一叶位叶片的叶绿素含量。14d后对叶片进行检测。4叶绿素含量的测定（分光光度法）：将0.1克叶片剪碎，入25mL容量瓶，加95%乙醇25ml，加盖，于30~40℃黑暗的温箱保温24h，至叶片变白，于663、645nm下比色（需注意比色前需添加95%乙醇至容量瓶刻度线）。用95%乙醇作为空白管调零。色素含量（mg·g-1）= 浓度（mg·L-1）×提取液总量（ml）/ 叶片重量（g）×1000叶绿素a的浓度 = 13.95 ′ OD665 – 6.88 ′ OD649 叶绿素b的浓度 = 24.96 ′ OD649 – 7.32 ′ OD6655实验结果与分析盐胁迫665nm649nm正常665nm649nm10.3320.13110.3190.15420.4030.14420.4650.16930.3780.12930.4420.17840.3340.14340.3550.161平均值0.3620.137平均值0.3950.166不同波长下盐胁迫与正常生长两种处理叶绿素提取液的吸光值，通过数据不难发现665nm处盐胁迫组吸光值平均值小于正常组的平均吸光值，部分正常组吸光值小于盐胁迫2号的吸光值可能是因为盐处理时盐浓度分布不均导致。通过观察649nm处吸光值可发现正常生长组的均大于盐胁迫处理过的。计算得出不同处理各组叶绿素含量处理叶绿素a含量（mg/g）叶绿素b含量（mg/g）叶绿素总含量