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食物过敏动物模型中小肠的变化 作者：纪经智， 陈虹， 陈岩峰， 陈壮桂， 温燕铭， 陈奋华 【摘要】 【目的】 应用卵蛋白致敏Nc/Jic雄性小鼠建立食物过敏动物模型，探讨食入过敏原后小肠黏膜的形态学及免疫学的变化。【方法】 选取Nc/Jic雄性28只，分为两组，实验组小鼠21只，用卵蛋白（OVA）致敏，OVA（2 mg/mL）经肠道攻击1 h、6 h、24 h后分别采血及小肠，对照组7只，用生理盐水代替OVA，处死小鼠取小肠。对小肠样本进行染色，在高倍镜下观察小肠的形态学和细胞学变化，计数100个细胞并对肥大细胞、嗜酸细胞和淋巴细胞等炎性细胞进行分类；用免疫组织化学染色法（S-ABC法）检测小肠黏膜细胞因子IL-4、IL-6，分析小肠黏膜免疫学的变化。【结果】 相对于对照组，实验组小鼠小肠黏膜 Hamp;E染色可见小肠黏膜水肿及炎性细胞浸润，1 h以肥大细胞为主（ Plt; 0.05）,6 h在小肠黏膜可见到大量嗜酸性细胞浸润（ P lt; 0.05）,而24 h则以淋巴细胞为主（ P lt; 0.05）。免疫组织化学染色显示在OVA致小鼠的小肠黏膜中，IL-4及IL-6阳性细胞数明显高于对照组（P lt; 0.05）。【结论】 比较对照组，在食物过敏时Nc/Jic雄性小鼠小肠黏膜不仅在形态学呈现免疫炎症反应及损伤，而且在免疫学方面出现Th2细胞因子占优势的明显变化。 【关键词】 食物过敏； 细胞因子； 小肠； 小鼠 食物过敏近年发病率在上升[1，2]，在发达国家近20%人口曾出现食物反应，它可以累及全身许多脏器，出现相应的临床表现如皮疹、哮喘等[3，4]。目前，食物过敏反应的发病机制仍不清楚，肠道作为消化食物的场所，在食物进入人体内起屏障作用，故在过敏反应中的有重要的作用。本研究对食物过敏动物模型的小肠进行研究，观察在食物过敏时小肠黏膜在形态学及免疫学等方面的变化，为进一步探讨食物过敏的发生、发展打下基础。 1 材料与方法 1．1 实验动物 实验用6周龄Nc/Jic雄性小鼠(购自Clea Co. Tokyo, Japan)。实验小鼠28只。小鼠在动物实验室恒温、恒湿度下喂养。 1．2 动物模型制作 采用坂本的方法[5]，卵蛋白（ovalbumin，OVA，Sigma Co., St. Louis, Mo）100 μg用生理盐水溶解稀释取经口投予，同时OVA100 μg和氢氧化铝（Alum, Pierce Co. Rockford, Ill，作为增强剂）0.1 mL腹腔注射，每周1次，共5次。实验最后1 d经口投与OVA 2 mg进行过敏原肠道攻击。对照组用生理盐水代替OVA ，余方法同试验组。OVA肠道攻击后1 h，6 h及24 h后，分别处死小鼠取血及小肠。每次处死致敏组小鼠7只，对照组为7只。 1.3 检测抗OVA-IgE抗体 用皮肤过敏试验（passive cutaneous anaphylaxis, PCA）检测小鼠血清抗OVA-IgE抗体。小鼠血清用生理盐水1 ∶ 80，1 ∶ 160，1 ∶ 320稀释后，在用于做PCA 的SD大鼠背部皮内注射0.1 mL，48 h后，于SD大鼠尾静脉注射50 mL/L 美蓝液，生理盐水作为阴性对照。30 min后处死大鼠，将动物背部的皮肤剥离，从皮肤内侧测量色素斑长径及短径，两者相加平均值大于5 mm以上为PCA阳性反应。实验组PCA阳性小鼠，对照组PCA阴性小鼠选为试验。实验组PCA阴性小鼠从实验组中除去。 １．4 小肠组织学检查及炎性细胞变化 Nc/Jic小鼠用乙醚麻醉后取出小肠用100 mL/L中性甲醛固定后石蜡包埋，然后，3～4 mm厚连续切片，进行HE染色，在高倍镜下观察小肠的病理变化，计数100个细胞并炎性细胞分类。为计数肥大细胞将切片作TB染色，随意选择3个0.01 mm2视野，计数肥大细胞数，求平均数。将实验组小鼠小肠黏膜炎性细胞浸润数与对照组比较。 1.5 免疫组织化学染色 小肠黏膜细胞因子IL-4,IL-6用免疫组织化学染色法（S-ABC法）检测。石蜡切片首先脱蜡水化，PBS冲洗，30 mL/L过氧化氢(H2O2)室温孵化5～10 min，以消除内源性过氧化氢的活性，PBS冲洗，滴加100 mL/L正常山羊血清封闭液，室温20 min，甩去多余液体。分别滴加1抗大鼠抗小鼠IL-4(IgG1:Genzyme Co.Cambridge,Mass.,USA)和大鼠抗小鼠IL-6(total IgG:Ramp;D System Inc.Minneapolis,Minn.,USA)。大鼠抗小鼠IL-4和大鼠抗小鼠IL-6抗体稀释度均为1 ∶