家兔头颅局部降温对脑损伤保护作用的探讨开题报告.doc

开题报告 家兔局部降温对脑损伤保护作用的探讨02级法文班 徐呈 兰晓曦 庞文璟 解轶声 林盟菲 孟晋 方原 吴贻明 一、实验目的： 急性脑外伤的病例在临床上较常见，如何降低脑外伤后继发性脑组织坏死，为治疗争取时间一直是令人感兴趣的事。本实验通过人工冬眠法和物理方法进行头颅的人工降温，比较两种方法对减轻急性前脑缺血时组织损伤的疗效，观察实验动物的中枢神经系统功能变化和全身的代谢状态。 二、实验原理： 本实验通过三动脉结扎法[1]（即结扎兔左侧椎动脉和两侧的颈总动脉）来复制急性前脑缺血再灌注模型。在复制病理模型的基础上，经过颅部局部降温和人工冬眠法全身降温处理后，观察动物中枢神经系统的损伤性反应和全身变化。人工冬眠法主要是通过氯丙嗪抑制下丘脑体温调节中枢，使体温调节失灵，从而实施全身的亚低温状态；头颅局部降温法是通过物理方法从外部对脑进行局部降温。在低温处理后，利用中枢兴奋剂尼可刹米兴奋延髓呼吸中枢作用，观察局部和全身的亚低温状态下中枢的应激反应，以及脑组织损伤程度。 国内外通常将低温划分为4种不同水平：轻度低温低温。目前认为低温对于脑损伤保护主要的作用机制有[5-7]：(1)减少脑组织蛋白破坏，促进脑细胞结构和功能修复；(2)保护血脑屏障，减轻脑水肿，降低颅内压，改善缺血后低灌注及防止过度灌注损伤；(3)抑制自由基生成，促进自由基的清除；(4)减少兴奋性氨基酸递质(特别是谷氨酸)的释放，抑制兴奋毒性[2]。 三、技术路线图： 四、实验动物： 家兔三只（要求体重相近，年龄相同，性别不限） 五、实验器材： 普通温度计（测肛温用）、热敏电阻温度计（测脑温用）、Powerlab生物信号处理系统（包括血压、呼吸、心电图）、高频电刀、i-STAT血液分析仪、脑颅钻孔机（5.0mm，杭州萧山医疗器械厂）、分析电子天平(1/10000克)、普通光学显微镜、兔子手术台、手术器械、气管插管、动脉插管、动脉夹等 六、实验药品： 戊巴比妥纳（30mg/kg）、氯丙嗪，异丙嗪（非那根）、10%尼可刹米、0.04% 多聚甲醛、生理盐水、冰块（袋装） 七、实验操作： 1．前脑缺血前准备： 家兔剃毛后，戊巴比妥纳30mg/kg全麻后，仰卧位固定家兔，先切开兔头顶皮肤，暴露颅骨，于矢状缝左侧0.3cm与眼眶后缘相交点钻一个2mm直径大小的圆孔，深达硬脑膜[3]。而后，于喉头下缘与第一肋上缘之间沿颈腹正中线作切口，常规分离两侧颈总动脉和气管。 1）分离右侧椎动脉：于右侧锁骨下缘分离皮下组织，切口下可见横向分布的胸浅肌，分离结扎后剪断肌束、切口深处可见横向走行的腋静脉和纵向走行的头臂静脉，分开二静脉的汇合处，见白色呈扇形分布的臂神经丛、其中有粉红色搏动的锁骨下动脉，彻底将该动脉与周围组织分离，且要有足够的长度(1.5-2.5cm)．并仔细辨认该动脉上的3个分支、其中一支向前内上走行至颈椎旁、即为椎动脉（椎动脉根部距颈根部皮肤表面之垂直距离：右侧约1.5cm，左侧约1.2cm；距锁内上方侧均约1.0cm；距颈前正中线右侧约0.8cm，左侧约0.6cm）因椎动脉位置较深，且与臂神经丛交叉而行，用血管钳和眼科镊仔细分离该动脉约0.2-0.4cm，穿线备用。 2）左侧颈总动脉插管，采集动脉取血2ml（标记为A1 B1 C1），连接血压换能器。 3）气管插管连接呼吸压力换能器。 4）心电图连线： II导联EGG连接(皮下插入针状电极)。家兔的右上肢连接负极（NEG）、左下肢连接正极（POS），右下肢连接地线。将电极连接到生物电导线上并通过生物电放大器连接到Powerlab主机的第4通道上（channel 4） 5）测量体温： 温度计测量肛温。 测量脑温：采用热敏电阻温度计通过开颅孔测量脑温度。 6）观察、记录动物瞳孔对光反射情况（在缺血-降温以及再灌注时每隔10min观察一次，在注射中枢兴奋药物后每隔2min，观察一次并记录）。 2．前脑缺血（持续时间约30min）： 断血时，用动脉夹夹闭右侧颈总动脉。然后将手术台竖立置动物于头高尾低位，头固定于右转后仰位，造成急性不全性前脑缺血，持续时间约30小时。 3．降温：（持续时间约60min） A组：体温维持正常，随时测量体温 B组：头颅敷冰袋进行头部局部降温（用冰袋降温，维持脑温在34-35℃的亚低温状态，诱导降温至35℃的时间约为50min[10]） C组：采用人工冬眠法（冬眠剂+物理降温法）进行全身降温： 静脉注射剂量： 氯丙嗪IV 50-100mg/kg.次 * 0.3 * 1/2 异丙嗪IV 0.5-1mg/kg.次 * 0.3 * 1/2 在降温过程中，C组的降温速度应尽可能与B组相符合，以保证两组的降温趋势、时间基本一致，排除降温时间不一致而带来的误差。 4．再灌注： 缺血3