研究生实验课-2016植物生理.pptVIP

二、实验原理 因此光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。 本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。 核黄素 被氧化物质 还原的核黄素 氧 氮蓝四唑 蓝色的化合物 （560nm） 2 + 2H+ H2O2 + O2 SOD 植物组织中超氧物歧化酶活性的测定 实验步骤 试 剂（酶） 用量(ml) 终浓度（比色时） 0.05mol/L磷酸缓冲液 130mmol/L Met溶液 750μmol/L NBT溶液 100μmol/L EDTA-Na2液 20μmol/L核黄素 酶液 蒸馏水 3 0.6 0.6 0.6 0.6 0.2 0.4 13mmol 75μmol 10μmol 2.0μmol 对照管加缓冲液代替酶液 总体积 6.0 1、酶液提取 2、显色反应 表1 各溶液加入量 0.5g，加1ml磷酸缓冲液(pH7.8) 研磨成浆，加缓冲液使终体积为4ml。取2~3ml于10000rpm下离心10分钟 3、SOD活性测定 以不照光的对照管作空白，在560nm下分别测定其它各管的光密度值，SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示。按下式计算SOD活性。 SOD总活性 = 单位：酶单位/g鲜重表示； Ack―照光对照管