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β重型地中海贫血儿童NK细胞频率及杀伤活性 　　[摘要] 目的 分析β重型地中海贫血儿童NK细胞频率及杀伤活性与输血诱导的免疫抑制的相关性。 方法 收集2011年1月～2013年12月在广州市妇女儿童医疗中心及中山大学附属第三医院进行输血治疗长达3年的β重型地中海贫血儿童20例（β重型地中海贫血组）及健康儿童20例（对照组），通过流式细胞技术检测其外周血NK细胞（CD3-CD56+）的频率及NK细胞杀伤活性（CD107a表达）。 结果 与对照组比较，长期输血的β重型地中海贫血组儿童外周血NK细胞频率显著降低[（4.5±2.8）% 比（12.0±4.0）%]，差异有统高度计学意义（P = 0.000）。外周血CD107a表达（NK细胞的杀伤活性）显著下调[（23.9±7.4）%比（51.4±11.9）%]，差异有统高度计学意义（P = 0.000）。 结论 β重型地中海贫血组儿童外周血NK细胞频率的减少及NK细胞杀伤活性（CD107a表达）的减弱，可能与输血诱导的免疫抑制相关。 　　[关键词] 输血；β地中海贫血；NK细胞；流式细胞术 　　[中图分类号] R725.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（b）-0031-04 　　同种异体输血可导致免疫功能抑制，一旦发生免疫抑制，人体更易受到细菌、病毒和肿瘤的侵袭，临床上通常表现为术后较高的细菌感染发生率和恶性肿瘤复发率[1-3]。目前关于同种异体输血导致的免疫抑制的机制仍不明确，已有报道显示同种异体输血能够抑制自然杀伤（NK）细胞的功能[4-8]。本研究通过分析β重型地中海贫血儿童NK细胞的表达频率及杀伤活性，旨在探讨长期输血对β重型地中海贫血儿童NK细胞细胞频率及杀伤活性的影响，为重型β地中海贫血儿童临床免疫监测和治疗提供理论基础。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2011年1月～2013年12月在广州市妇女儿童医疗中心及中山大学附属第三医院进行输血治疗长达3年的β重型地中海贫血儿童20例为β重型地中海贫血组，其中男13例，女7例，年龄（9.90±4.87）岁。排除贫血以外的其他疾病如细菌、病毒性感染、肿瘤等。选取同期同龄健康体检儿童20例作为对照组，男11例，女9例，年龄（10.80±5.92）岁。所有患者及患者家属均知情同意。 　　1.2 仪器与试剂 　　BD LSRⅡ流式细胞仪（美国BD公司），FITC标记的鼠抗人CD3、APC标记的鼠抗人CD56、PE标记的鼠抗人CD107a、鼠抗人lgG1同型对照抗体、红细胞裂解液、阻断剂GolgiStop均购自美国BD公司；刺激剂佛波酯（PMA）、钙离子导入剂伊屋诺霉素（Ionomycin）购自美国Sigma公司，人淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物。 　　1.3 研究方法 　　1.3.1 NK细胞比例分析 取100 μL无菌外周抗凝血，加入FITC标记的鼠抗人CD3、APC标记的鼠抗人CD56单克隆抗体各20 μL，室温闭光孵育30 min，红细胞裂解液室温裂解15 min后用流式缓冲液离心洗涤两次，500 μL流式缓冲液重悬，流式细胞仪检测。 　　1.3.2 NK细胞CD107a表达分析 密度梯度离心无菌分离外周血单个核细胞（PBMC），将PBMC用完全1640培养基调整细胞浓度至1×106个/mL，置于24孔板，加入刺激剂PMA（20 ng/mL），Ionomycin（1 μg/mL），PE标记的鼠抗人CD107a或同型对照抗体20 μL。1 h避光刺激后加入阻断剂GolgiStop，继续孵育5 h。加入FITC标记的鼠抗人CD3、APC标记的鼠抗人CD56单克隆抗体各20 μL，室温闭光孵育30 min后用流式缓冲液离心洗涤2次，500 μL流式缓冲液重悬，流式细胞仪检测NK细胞（CD3-CD56+）表面CD107a表达。 　　1.4 统计学方法 　　采用SPSS16.0统计软件进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验。非正态分布的计量资料用中位数（M）及四分位数（P25，P75）表示，采用秩和检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 NK细胞细胞频率 　　结果显示：与对照组比较，β重型地中海贫血组外周血NK细胞频率显著减少[（4.5±2.8）%比（12.0±4.0）%]，差异有统高度计学意义（P = 0.000）。见图1。 　　2.2 NK细胞杀伤活性（CD107a）表达 　　结果显示：β重型地中海贫血组外周血NK细胞表面CD107a表达频率为（23.9±7.4）%，对照组为（51.4±11.9）%，β重型地中海贫血组外周血NK细胞的