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探究单胺氧化酶 A 多态性与抑制控制能力的关系 　　近年来，随着分子生物学的发展，情绪个体差异的遗传背景受到越来越多的关注。研究发现，情绪的产生和调节与神经递质代谢酶基因多态性有关。单胺氧化酶( MAO) A 是单胺类神经递质的主要代谢酶类，MAO A 多态性与攻击行为〔1〕、焦虑症〔2〕等关系密切，动物研究〔3〕也证实 MAO A 多态性与攻击性有关。本课题组前期研究〔4〕也发现 MAO A 多态性与愤怒情绪的产生与表达相关。攻击性行为和愤怒、抑郁情绪等的产生均与人的执行功能( EF) ，尤其是抑制控制密切相关〔5〕，那么 MAOA 多态性对愤怒等负性情绪的影响是否因为其对抑制控制能力的调节呢? 本文选择事件相关电位技术( ERPs) 考察不同MAO A 基因型的被试者抑制控制能力是否不同。 　　1 材料与方法 　　1. 1 对象 以某学院在校正常大学生为研究对象，经伦理委员会批准后招募被试，填写知情同意书及一般情况调查表。 　　1. 2 试验程序和任务 刺激由 E-prime 2. 0 系统控制呈现。参考文献，以黑色单/双三角形构成 Go/Nogo 任务刺激图形，共8 组刺激，每组含100 个试次，其中 Go 任务为60 个，Nogo 任务为40 个。要求被试 Go 任务时做按键反应。按键左右手在被试者中交叉平衡。整个实验约需要20 min，实验完成后给予被试一定酬劳。 　　1. 3 数据采集与处理 采用 NuAmps40 导系统 ( NeuroscanInc) 记录脑电。同步记录连续脑电图( EEG) 与行为学数据，用Neuroscan4. 5 软件对脑电数据进行离线分析。对反应正确的EEG 进行分类叠加，得到 Go 和 Nogo 刺激产生的两类 ERP 数据。对得到的 ERPs 进行 30 Hz( 24 dB/oct) 无相移低通数字滤波。 　　1. 4 基因分型 　　1. 4. 1 多态性位点的选择 根据报道，从人类基因组单体型图( HapMap) 中选出能代表亚洲人 MAO A 基因单核苷酸多态性( SNP) 阳性信号的标签 SNP rs5905613 基因多态性位点，考察其多态性( CC、CT、TT) 对抑制控制能力的影响。最终各基因型入组被试 CC 11 人，CT 9 人，TT 16 人。 　　1. 4. 2 PCR 扩增目的片段 以白细胞基因组 DNA 为模板，扩增目的基因片段。正义引物 CCACAATAGATAACCTTGGGC，反义引物 CCTGGGCCAAAAATGCTATTC，扩增片段长度 222 bp。PCR 反应体系: 模板 DNA 1 mu;l，10 倍 PCR 缓冲液 1. 5 mu;l，MgCl2( 25 mmol/L) 1.5 mu;l，dNTP( 10 mmol/L) 0.3 mu;l，Taq 酶 1.25 U，引物各0.25 mu;l，使用去离子水补足体积至 25 mu;l。反应条件:94℃ 预变性 2 min; 94℃ 变性 15 s、60℃ 退火 15 s、72℃ 延伸 30 s共35 个循环;72℃延伸 3 min。扩增完成后 1.2%琼脂糖凝胶电泳获得目的核苷酸片段。各组被试一般情况( 年龄、学历、性别) 无显著性差异，具有可比性。 　　1. 4. 3 SNP 位点连接酶特异检测反应( LDR) 针对 SNP 位点设计识别两种不同碱基的左端探针( 长度相差3 bp) ，以及带羟基荧光素( FAM) 的右端共用探针，终产物长度差别即为左端探针的长度差别。LDR 探针序列为右端公用探针 P-TGTAC-CATTTGTACTTGAGCCAGCATTTTTT-FAM， 左 端 探 针 TCTTTTTTTTTACCAAATTCCTCACTATCACAGGC，连接产物为 64 /C，左 端 探 针 TT TTTTTTTTTTTTACCAAATTCCTCACTAT-CACAGGT，连接产物为 67 /T。连接体系: PCR 产物 3 mu;l、10 times;Taq DNA 连接缓冲液 1 mu;l、Taq DNA ligase 5 U，特定 LDR 探针各0.1 pmol，去离子水补足体积至 10 mu;l。连接反应参数:94℃变性30 s、60℃退火并连接3 min，循环20 次。反应结束后，4℃保存待用。取1 mu;l 连接反应产物，加 10 mu;l 上样缓冲液( 已混入 Marker) ，95℃ 变性 3 min，立即冰水浴。连接产物经 ABI3730XL 测序仪扫描，根据目的峰与 Marker 的位置差距来读取结果。 　　1. 5 统计学方法 导出行为学数据( 反应时、正确率、漏报率、错报率)