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染色姜黄中金胺O的检测方法讨论 　　姜黄收载于《中国药典》2010 年版一部，为姜科植物姜黄Curcuma longa L. 的干燥根茎。具有破血行气，通经止痛的功效，用于胸胁刺痛，胸痹心痛，痛经经闭，癥瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛。为中医临床较常用中药，也是多种中成药的原料药。由于中药材市场经营还比较混乱，掺杂使假现象比较严重，经过市场调查发现，姜黄除用片姜黄冒充外，有一部分可能由于保存时间过长或保存温度过高，出现表面颜色变浅现象，个别中药经营人员为了追求经济利益，用化工原料金胺O 进行非法染色。姜黄具有抗癌作用，金胺O 对人体有较大的危害，具有致癌作用，不应出现在中药中。近年来，中药材、中药饮片常用报道非法使用金胺O 染色。本研究通过TLC 法，HPLC-PAD 法、HPLC-MS 法，鉴定证明姜黄所用染料为金胺O，并建立了检查方法，实验结果如下。 　　1 仪器和试药 　　1.1 仪器 　　Waters2695-2988，PAD 检测器，Empower 2 色谱工作站。Agilent1200-6410B 液相色谱- 质谱联用系统，ChemStation 色谱工作站。 　　1.2 试药 　　金胺O 对照试剂购自中国食品药品检定研究院，批号111770-201011，姜黄对照药材购自中国食品药品检定研究院，批号121188-200502。姜黄药材、饮片购自吉林省各地区的市售样品。薄层色谱板为硅胶G 薄层色谱板，购自青岛海洋化工厂分厂;水为超纯水，经检验合格，乙腈为色谱纯，其余乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、氨水、磷酸二氢钾、磷酸为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 薄层鉴别 　　取本品粉末3g，加25mL 70%乙醇，密封，超声处理30min，过滤，滤液作为供试品溶液。另取金胺O 对照试剂10mg，置100mL 量瓶中，加70%乙醇适量使溶解，再加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。再取姜黄对照药材3g，加25mL 70%乙醇，密封，超声处理30min，过滤，滤液作为供试品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录Ⅵ B)试验，取供试品溶液和对照药材溶液各10mu;L、对照试剂溶液5mu;L，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 氨水(4:5:1:1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即检视。供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，若显相同颜色的斑点，说明样品中含有金胺O 染色。若不显示相同颜色的斑点，说明样品中不含金胺O 染色。对照药材色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。 　　2.2 金胺O的HPLC-PAD法确认 　　2.2.1 色谱条件 色谱柱为phenomenex Luna C18(4.6mmtimes;250mm，5mu;m)，以乙腈-0.05mol/L 醋酸铵(35:65)为流动相;采用二极管阵列检测器，检测波长为432nm。理论塔板数按金胺O 对照试剂色谱中的主峰计算，应不低于3000。 　　2.2.2 对照试剂溶液的制备 对照试剂溶液的制备取金胺O 对照试剂10mg，置200mL 量瓶中，加70%乙醇适量使溶解，再加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。 　　2.2.3 供试品溶液的制备 取上述薄层鉴别项下的供试品溶液，用微孔滤膜(0.45mu;m)滤过，即得。 　　2.2.4 阴性对照溶液的制备 取姜黄对照药材3g，加70%乙醇25mL，密塞，超声处理30min，滤过，即得。 　　2.2.5 测定法 吸取供试品溶液与对照试剂溶液及阴性对照溶液各10mu;L，注入液相色谱仪，记录色谱图。 　　2.2.6 专属性试验 为了证明该方法具有专属性，将对照试剂溶液，含金胺O 样品、阴性样品(对照药材)溶液，分别进样，进行液相色谱的考察，结果薄层色谱含有金胺O 的样品溶液呈现与金胺O 对照试剂保留时间相同的色谱峰;比较320 ～ 450nm波长范围的紫外一可见吸收光谱，吸收光谱相同。阴性样品(对照药材)溶液未检出与金胺O 对照试剂相同的色谱峰。从而证明该补充检验方法和检验项目具有专属性。 　　2.3 金胺O的HPLC-MS法进一步确认 　　2.3.1 色谱条件 色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Phenomenex Gemini C18 色谱柱，以乙腈-0.05mol/L 醋酸铵(35:65)为流动相，流速为0.6mL/min，检测波长为432nm。 　　2.3.2 质谱条件 电喷雾离子源(ESI)正离子检测，二级质谱全扫描模式，母离子m/z268.1，子离子扫描范围m/z20 ～ 300，;干燥气温度350℃，干燥气流速10L/min;源电压4kV;裂解电压170V;雾化气压力2