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染色蒲黄中柠檬黄的检测方法讨论 　　蒲黄收载于《中国药典》2010 年版一部，为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L.、东方香蒲Typha orientalis Presl 或同属植物的干燥花粉。具有止血，化瘀，通淋的功效，用于吐血，衄血，咯血，崩漏，外伤出血，经闭痛经，胸腹刺痛，跌扑肿痛，血淋涩痛。为中医临床常用中药，也是多种中成药的原料药。现代研究证明具有镇痛、抗凝促凝(与浓度有关)、促进血液循环、降低血脂、防止动脉硬化、保护高脂血症所致的血管内皮损伤、兴奋收缩子宫、增强免疫力等作用，还有促进肠蠕动、抗炎、抗低压低氧、抗微生物等药理作用，临床有广泛的用途。由于中药材市场经营比较混乱，掺杂使假现象比较严重，经过市场调查发现，蒲黄伪品多为该植物非药用部位的粉末，经过染色按正品销售使用，染色多用化工原料金胺O 进行非法染色，但由于近年来药监部门加大了中药非法染色的打击力度，金胺O 染色现象有所减少，但仍有一些不法商贩将蒲黄伪品用柠檬黄非法染色。柠檬黄，又称酒石黄、酸性淡黄、肼黄。化学名称为1-(4- 磺酸苯基)-4-(4- 磺酸苯基偶氮)-5- 吡唑啉酮-3-羧酸三钠盐，为水溶性合成色素。呈鲜艳的嫩黄色，是单色品种。多用于食品、饮料、化妆品、饲料、烟草、玩具、食品包装材料等的着色，也用于羊毛、蚕丝的染色及制造色淀。柠檬黄不是蒲黄应有的化学成分，在药学领域主要用于胶囊壳的着色剂。笔者通过TLC 法，HPLC-PAD 法，鉴定证明蒲黄所用染料除金胺O 外，还有用柠檬黄染色问题，并建立了检查方法，现报道如下。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　昆山市超声仪器有限公司KQ-400KDB 型超声波清洗机;Linomat 5 卡玛半自动点样仪;Waters2695-2988，PAD 检测器，Empower 2 色谱工作站。 　　1.2 试药 　　柠檬黄对照试剂购自中国计量科学研究院，批号：10002，蒲黄对照药材购自中国食品药品检定研究院，批号121225-201003。蒲黄药材、饮片购自吉林省各地区的市售样品。薄层色谱板为硅胶G 薄层色谱板，购自青岛海洋化工厂分厂;水为超纯水，经检验合格，甲醇为色谱纯，醋酸铵为分析纯。 　　2 方法 　　2.1 TLC检查 　　2.3 HPLC检查方法的建立与验证 　　2.3.1 线性范围考察 精密称取柠檬黄对照试剂适量， 加甲醇制成5.49、10.98、21.96、43.92、87.84mu;g/mL 的溶液，分别精密吸取10micro;L 进样测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Y=4051375.3501X-731.5417(r=1.0000)，结果表明柠檬黄在0.0549 ～ 0.8784micro;g 范围内呈线性关系，符合外标法测定的要求。 　　2.3.2 精密度试验 取同一供试品溶液，在同一色谱条件下，重复6 次，每次10mu;L，注入液相色谱仪，测定其柠檬黄色谱峰面积值，计算RSD=0.1%。 　　2.3.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，在同一色谱条件下，24h 内重复进样6 次，每次10micro;L，测定柠檬黄色谱峰面积，RSD=0.1%，结果表明24h 内供试品溶液中柠檬黄基本稳定。 　　2.3.4 重现性试验 取同一供试品6 份，分别按供试品溶液制备的方法制成供试品溶液，取对照试剂溶液及上述供试品溶液分别进样，结果6 份样品均检出柠檬黄。确定所采用的检查方法具有重现性。 　　2.3.5 耐用性 通过用同一供试品溶液的3 支色谱柱进样，证明了采用的方法在实验条件有所改变时，该方法仍然适用。 　　2.3.6 回收率 精密称取已知含量的供试品粉末(柠檬黄含量为0.03%)6 份，每份约0.5g，分别精密加入柠檬黄对照试剂溶液(0.1098mg/mL)1.4mL，依法测定，计算回收率，测得柠檬黄的平均回收率为98.61%，RSD=0.5%。 　　2.3.7 样品测定 取市售姜黄样品10 批，按上述方法测定柠檬黄含量，结果有6 批含有柠檬黄，含量在0.05 ～ 0.50mg/g。 　　3 结果 　　薄层色谱试验中，阳性样品在与对照试剂色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点;阴性对照在与对照试剂色谱相应的位置上，则不显相同颜色的斑点。经过HPLC-PAD 法确认，阳性样品色谱图中，在与对照试剂相同保留时间有相同的色谱峰，阴性对照无相应的色谱峰，进一步证明方法的准确性。 　　4 讨论 　　柠檬黄，为水溶性合成色素，是食品常用的染色剂之一，在不同食品中的使用限量不同，最高使用向量均为0.5mg/g，通常情况下，在常规用量下使用是安全的，但不是蒲黄应有的化