细谈通络汤对腰椎间盘突出症的影响.docVIP

细谈通络汤对腰椎间盘突出症的影响 　　腰椎间盘突出症(lumbar intervertebral discherniatio，LIDH)是临床常见病、多发病，主要临床症状表现为各种腰痛，常伴有腰骶部疼痛，如果没有及早发现和治疗，还会引起多种继发病，严重降低患者的生活质量。据统计，西方国家LIDH 总发病率为15.2%~30%，我国约为21%，各国每年为LIDH 付出的医疗费用巨大。随着人口老龄化以及生活节奏的加快，其发病率呈逐年增加的趋势。现代医学研究表明，除椎间盘的机械压迫可引起疼痛外，炎症因子所介导的炎性反应、椎间盘免疫反应均参与腰痛发生机制。本课题旨在探讨通络汤(生地黄、鸡血藤、延胡索等)对LIDH 模型大鼠的治疗作用。 　　1 材料 　　1.1 药物及试剂 　　通络汤临床用量为：生地黄10 g、鸡血藤5 g、延胡索2.5 g，酒浸泡1 周后得酒剂，每周1 剂，每天2 次，折合生药2.5 g·d?1。生地黄(批号产地：河南)、鸡血藤(批号：121102，产地：湖南)、延胡索(批号产地：河北)均购自甘肃兰州惠仁堂药店，由甘肃中医学院晋玲教授鉴定为正品。实验中按临床方法制备药液，浓缩至500 mL，含生药4.5 g·mL?1，临用前用蒸馏水稀释至所需浓度。根据体表面积估计法计算出大鼠高、中、低剂量分别为21，105，52.5mg·kg?1;青霉素钾粉针剂(上海新先锋药业有限公司产品，批号A850601，规格：80 U);布洛芬缓释胶囊(中美天津史克制药有限公司产品，批号规格：每粒30 g);水合氯醛(天津市登封化学试剂厂，批号;硫化钠(天津市致远化学试剂有限公司，批号;大鼠前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)酶标试剂盒(批号：201406)、大鼠肿瘤坏死因子-alpha;(tumor necrosisfactor-alpha;，TNF-alpha;)酶标试剂盒(批号：201409)、一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase，NOS)酶标试剂盒(批号均购自南京森贝伽生物科技有限公司;一氧化氮(nitric oxide，NO)酶标试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号。 　　1.2 仪器 　　RB-200 智能热板仪(成都泰盟科技有限公司);Biofuge stratos 高速冷冻离心机(美国Kendro实验室产品公司);UV-2401PC 紫外分光光度计(美国安捷伦科技有限公司);BIO-RAD 酶标检测分析仪(美国伯乐公司);LBY-N6A 血液流变仪(北京普利生仪器有限公司);BX51-32H01 显微镜(日本奥林巴斯公司)。 　　1.3 动物 　　SPF 级Wistar 大鼠48 只，♀♂各半，体质量(300plusmn;20)g，购自甘肃中医学院实验动物中心，动物合格证号为62001000000051。 　　2 方法 　　2.1 分组及给药 　　48 只大鼠随机分为6 组：正常组(生理盐水10 mL·kg?1)、模型组(生理盐水10 mL·kg?1)、通络汤高、中、低剂量组(21，105，52.5 mg·kg?1)、布洛芬组(105 mg·kg?1)。除正常组外其余各组大鼠采用手术造模，造模5 d 后开始灌胃给药，每天1 次，连续20 d。 　　2.2 大鼠腰椎间盘突出症模型 　　建立用8%硫化钠溶液脱掉大鼠背部被毛，次日以10%水合氯醛2 mL·kg?1 腹腔注射麻醉，于尾根部距肛门约1 cm 处切断尾椎，取出尾椎的一个髓核及椎间盘周围软组织，缝合伤口。以L5 棘突为中心取背部正中纵行切口，沿棘突两侧剥离骶棘肌并向两侧分开，显露双侧L4、L5 椎板。咬除L4、L5 棘突及右侧椎板，将取出的自体髓核轻轻放于硬膜外腔相当于L4~L5 神经根的部位，注意勿压迫脊髓及神经根，缝合伤口。单笼喂养3 d，同时腹腔注射青霉素每只80 000 U 使大鼠尾部伤口基本收口结痂。 　　2.3 热板法测大鼠痛阈值给药 　　10，20 d 将大鼠置于恒温热板(55plusmn;0.5 ℃)上，室温20 ℃，记录大鼠自足底接触热板至出现嘶叫的时间(即痛阈值)，测量3 次取平均值。若60 s仍无反应，则取出大鼠，按60 s 计算。 　　2.4 玻片法测大鼠凝血时间 　　洗净玻片，干燥消毒备用。给药10，20 d 后，用毛细管在大鼠眼眶静脉丛取1 滴血于玻璃片上，血滴直径约5 mm，立即用秒表记时。每30 s 用清洁针头自血液边缘向内轻轻