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解析常温低基质亚硝化反应器功能菌群 　　　　传统生物脱氮工艺经过硝化和反硝化作用两个阶段完成脱氮过程，硝化反应包括氨氧化与亚硝酸盐氧化两个过程，分别由氨氧化菌( AOB) 和亚硝酸盐氧化菌( NOB) 负责完成.亚硝化过程就是使硝化反应停留在氨氧化阶段，避免亚硝酸盐被氧化成硝酸盐，从而形成亚硝酸盐积累.若亚硝化过程与后续厌氧氨氧化工艺耦合( PN-ANAMMOX) ，则只需要将57%的氨氧化成亚硝酸盐，剩余的氨氮与亚硝酸盐按如下反应式完成脱氮过程，即NH4++1.31NO2-+0.066HCO3-+0.13H+rarr;1.02N2+0.26NO3-+0.066CH2O0.5N0.15+2.03H2O.与传统硝化/反硝化脱氮作用相比，PNANAMMOX理论上可节省62. 5%的曝气能耗，无需有机碳源，且污泥产量低，受到广泛关注.若要维持常温低基质生活污水PN-ANAMMOX 工艺稳定运行，关键在于实现稳定的亚硝化过程，即PN反应器出水NO2-与NH4+比值稳定，实质就是控制条件促进AOB 生长繁殖而淘汰NOB.本研究以经过厌氧-好氧( A/O) 除磷工艺去除磷及大部分有机物的生活污水为对象，完成亚硝化( PN) 反应器的启动. 待PN 反应器稳定运行后，通过扫描电镜( SEM) 、荧光原位杂交( FISH) 、变性梯度凝胶电泳( DGGE) 等技术，分析污泥微观结构、解析功能菌群特性，探索功能菌群与反应器亚硝化效果之间的关系，为促进AOB 富集、提高PN 反应器效能提供理论基础. 　　1 实验 　　1.1 反应器装置及进水水质 　　反应器装置为不锈钢制的推流式反应器，后面接由有机玻璃制成的竖流式形式二沉池( 图1) .主体反应器规格为2.0 mtimes;0.6 mtimes;1.0 m，总容积为1.2 m3，分隔成4 个相同大小的格室.通过设置导流孔防止流水返混，保持反应器连续流运行所需的推流条件.A/O除磷工艺的出水用作推流式反应器进水，进行亚硝化实验.根据运行需要控制每个格室的曝气量，通过单独的气体流量计检测曝气强度. 二沉池总容积为300 L，其中部分污泥进行回流，补充反应器污泥浓度.推流式亚硝化反应器接种600 L 某污水厂曝气池末端的污泥( 6 650 mg /L) ，硝化性能良好.实验用水为实际生活污水，即北方某生活小区化粪池污水经过厌氧- 好氧( A/O) 除磷工艺去除大部分磷、COD、BOD，反应器进水水质如表1 所示. 按中国国家环保局颁布的标准方法测定进出水三氮质量浓度: 氨氮，纳氏试剂光度法; 亚硝酸盐氮，N-( 1-萘基) -乙二胺光度法; 硝酸盐氮，紫外分光光度法.温度、pH 及溶解氧采用WTW 在线pH/DO 检测.1.2 扫描电镜( SEM) 观察 　　收集接种污泥及反应器启动成功后的硝化污泥，进行扫描电镜观察微观结构. 方法如下: 样品加入磷酸盐缓冲液( PBS，pH= 8.0) 洗涤3 次; 加入体积分数为2.5%的戊二醛，于冰箱中4 ℃ 条件下固定2 h; 加入磷酸缓冲溶液( PBS，0.1 mol /L，pH= 8.0) 清洗10 min; 之后进行梯度酒精脱水，体积分数分别为30%、50%、70%、90%，再用无水乙醇脱水3 次，每次10 min; 之后进行置换反应，即加入无水乙醇与乙酸异戊酯比为1 ∶ 1 及纯乙酸异戊酯各1 次，每次15 min; 对样品进行冷冻、真空干燥24 h、喷金，通过扫描电镜( HITACHIS-4300) 观察污泥微观结构. 　　1.3 荧光原位杂交( FISH) 　　对接种污泥与硝化污泥进行荧光原位杂交分析，所用探针如表2 所示，污泥样品经过预处理、杂交、洗涤后进行观察.杂交过程所用探针杂交液组成为: 体积分数20% ～ 55% 的甲酰胺，0. 9 mol /L NaCl，20 mmol /L Tris -HCl ( pH = 7. 2) ，质量分数0.01%的SDS; 杂交后洗脱液组分为: 56 ～ 225 mmol /L NaCl，20 mmol /L Tris-HCl ( pH = 7.2) ，10 mmol /L EDTA，0.01%SDS.杂交后的玻片晾干后，通过荧光显微镜( BX51) 及CellSens Dimension 软件观察，分析杂交结果.随机捕捉20 张FISH 图像，利用Image-Pro Plus 6.0软件分析AOB 与NOB 所占比例 　　1.4 变性梯度凝胶电泳( DGGE) 及测序分析 　　1.4.1 DNA 提取与PCR 扩增 　　采用改进的氯仿-SDS 方法提取硝化污泥微生物基因组DNA. 取1 g 污泥，加入DNA 提取液2.7 mL( 100 mmol /L Tris -