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谈地黄丸类方对肾阳虚大鼠免疫功能的影响 　　肾阳虚证为中医的基本证型之一，临床主要表现为面色晄白、形寒肢冷、精神不振、腰膝酸冷、阳痿阴缩、遗精尿频、小便清长、余沥不净、夜尿频多，女子带下清稀、宫寒不孕，或尿少心悸、肢肿气短、喘咳痰饮等，舌淡苔白润，脉虚弱无力。研究发现肾虚证与T 淋巴细胞的变化密切相关，而人体的T 淋巴细胞来源于骨髓干细胞，在胸腺中分化成熟，是免疫系统的主要效应细胞，也是最重要的免疫细胞，主要介导细胞免疫。目前肾虚本质的研究主要集中在神经内分泌系统、免疫系统、自由基、衰老等方面。本研究采用经典肾阳虚造模方法用氢化可的松注射液肌注2 周造成肾阳虚大鼠模型，通过应用酶联免疫法( ELISA) 检测各组大鼠血清IL-2 及IL-4 的含量; 应用荧光定量PCR 法检测各组大鼠肾组织NF-kappa;B mRNA 表达水平，评价地黄丸类方对肾阳虚大鼠免疫功能的影响。 　　1 材料 　　1.1 实验动物 　　SPF 级SD 大鼠，雄性，体质量180 ～ 220 g，广州中医药大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK( 粤) 2008-0020。 1.2 药物与试剂 　　六味地黄丸( 河南省宛西制药股份有限公司，批号: 120309) ; 知柏地黄丸( 河南省宛西制药股份有限公司，批号: 120301) ; 桂附地黄丸( 河南省宛西制药股份有限公司，批号: 120402) ; 氢化可的松注射液( 天津金耀氨基酸有限公司，批号: 1110211) ;无菌生理盐水( 贵州科伦药业有限公司，批号 ; RNAiso Plus( TaKaRa BIO INC，Cat.No.#9108 /9109) ; PrimeScriptTM RT 试剂盒( TaKaRa BIOINC，Cat.#RR047A) ; 氯仿( gt;99.8%) 、EDTA-2Na·2H2O、焦碳酸二乙酯( 美国Sigma 公司) ; Tris( TheDow Chemical Company) ; 无水乙醇、异丙醇( 广州化学试剂厂) ; 引物( Invitrogen 公司) 。 　　1.3 实验仪器 　　LF26-MESJ 分析天平( 香港佳立国际有限公司) ; TC-3K 电子天平( 深圳市华恒科技有限公司) ;MC-246 欧姆龙体温计[欧姆龙( 大连) 有限公司];RT-2100C 酶标仪( 深圳雷杜公司) ; FastPrep-24 匀浆机( MP 公司) ; LX-100 手掌型离心机( 江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司) ; YXQ-LS-30SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器( 上海博迅实业有限公司医疗设备厂) ; GL-3250A 磁力搅拌器( 江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司) ; SKG-01 电热恒温干燥箱( 湖北省黄石市医疗器械厂) ; TGL-16G-A 冷冻离心机( 上海安亭科学仪器厂) ; 核酸蛋白检测仪( 美国Bio-Rad) 。 　　2 方法 　　2.1 分组与造模 　　取SD 大鼠80 只，体质量180～220 g，雄性，随机分为正常组10 只，氢化可的松组70 只。除正常组肌肉注射等体积生理盐水外，其余大鼠每天于后肢外侧肌肉注射氢化可的松注射液2.5 mg /100 g，左右后肢交替注射，连续注射14 d。造模结束后，即第15 天开始，除正常组外，其余大鼠按照体质量及肛温随机分为模型组、六味地黄丸低( 43.2 mg /mL) 、高剂量组( 172.8 mg /mL) ，桂附地黄丸低( 40.8 mg /mL) 、高剂量组( 163.2 mg /mL) ，知柏地黄丸低( 40.8 mg /mL) 、高剂量组( 163.2 mg /mL) ，每组10 只。六味、桂附、知柏地黄丸高、低剂量组分别为灌胃0. 9 g /kg 和3.6 g /kg( 生药量/体质量) 混悬液，灌胃体积为10mL /kg，正常组、模型组给予等体积灭菌蒸馏水，连续21 d。末次给药后1 h， 10%( phi;) 水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉采血5 ～ 6 mL，平均分装于无肝素钠离心管和有肝素钠离心管中，静止1 ～ 2 h，3 000 r /min离心15 min，分离血清、血浆，冻存于-80 ℃超低温冰箱中。 　　2.2 血清IL-2、IL-4 水平检测 　　取各组大鼠血清样品，按照试剂盒说明书检测各组大鼠血清白细胞介素2( IL-2) 、白细胞介素4( IL-4) 。 　　2.3 大鼠肾组织NF-kappa;B mRNA 表达水平检测 　　分别配制0. 5 mol /L，pH8. 0 的EDTA 溶液、0. 1%DEPC 水、10times;TE Buffer (