权威!斯丹赛Talen技术及诱导多功能干细胞-iPS在医学领域的发展应用幻灯片.pptVIP

设置不转染同时加药的阴性对照，如果加药后阴性对照全部死亡，并且2-3天后撤去药物正常继续培养时没有重新长起来，则才能说筛出来的细胞是阳性转染成功的。 * 脊髓性肌萎缩SMA 活运动神经元SMN1 病人会肌肉萎缩，瘫痪，幼年死亡 * Alpha-1 antitrypsin 抗胰蛋白酶(AAT) deficiency 肝脏疾病 可进一步导致肝硬化和肝癌 * 大脑和脊髓的细胞一般是不会再生的，所以过度的损害可能是毁灭性的，不可逆转的。神经退行性疾病是由神经元或其髓鞘的丧失所致， 随着时间的推移而恶化，以导致功能障碍。 神经退行性疾按表型分为两组： * 一类影响运动，如小脑性共济失调； * 一类影响记忆以及相关的痴呆症。 * 多巴胺能神经元的变性死亡 * 脊髓性肌萎缩SMA 活运动神经元SMN1 病人会肌肉萎缩，瘫痪，幼年死亡 * * ` TALEN 的实际应用 DNA水平的基因敲除 DNA水平的定点插入 DNA水平的单碱基修饰（点突变） DNA水平的miRNA敲除 以上的各种组合。。。。。 Nat Biotechnol 2013 Jan; 31(1):23-4 TALEN 的实际应用 应用 I：DNA水平的基因敲除 应用 II：DNA水平的定点插入 Nature Biotechnology 29， 731-734 （2011） TALEN 的实际应用 应用 III: 基因定点修复 TALEN 的实际应用 TALEN 的实际应用 应用 IV：DNA水平的miRNA敲除 PlOS one 8 (9), 2013(5) TALEN广泛应用 Biotechnol Bioeng. 2013 Mar 18. doi: 10.1002/bit.24890 拟南芥 短兵草 牛 蟋蟀 果蝇 仓鼠 人 青鳉 小鼠 线虫 大鼠 水稻 蚕 烟草 酵母 斑马鱼 TALEN 技术服务及相关产品 短期： 基因Knock-out 或Knock-in动物模型 （mouse and zebra fish） 基因Knock-out 或Knock-in细胞建系服务： 1）单拷贝Knock-out细胞系； 2）双拷贝Knock-out细胞系； 3）基因Knock-in细胞系 TALEN质粒构建服务：1）质粒构建 2）测序质粒 3）活性检测 长久来说： 建立一套TALEN 的方法。 斯丹赛Talen试剂盒（模块、感受态、载体） 现状 斯丹赛Talen kit已经成功帮助： 北京大学生命科学学院 张老师课题组???成功建立人ES细胞基因敲除系，阳性克隆率2% 北京大学系统生物医学研究所??? 尹老师课题组 成功建立人结肠癌细胞基因敲除系，阳性克隆率5% 华东师范大学?? 刘老师课题组?? 得到的10只F0代小鼠中有3只是突变体 湖南师范大学心脏发育实验室??? 邓老师课题组??? 分别得到斑马鱼3个基因敲除的F1代杂合体， 果蝇1个基因敲除的F1代杂合体，F1代中突变体的概率约为30%； 清华大学? 罗老师课题组? 成功建立人ES细胞基因敲入系，阳性克隆率38%；?? 中国科学院生物物理研究所? 王老师课题组? 成功建立小鼠某细胞基因敲除系，阳性克隆率2%； 上海生化所? 蒋老师 利用培训班拿到的平板直接建立仓鼠细胞某基因敲除系； 华中科技大学? 于老师? 成功得到斑马鱼某基因敲除的突变体； ?中国科学院水生生物研究所? 肖老师课题组? 成功得到斑马鱼F1代杂合子，效率为14/16，并且后续 得到F2代纯合子 复旦大学遗传所? 姚老师课题组?? 成功得到斑马鱼某基因敲除的F1代杂合体 健康所? 荆老师课题组???成功的得到了斑马鱼突变体，打靶效率达20%； 珠海威康健生物科技有限公司? 杨老师??成功得到果蝇某基因敲除的突变体，F0代突变率2/1000。 …………… 我们相信，我们也可以帮助您的实验室建立一套Talen敲除的方法 第二十五期全国TALEN技术培训班 （正式邀请函） 时间：2013年7月25日 地点：上海市浦东新区蔡伦路720弄301室 培训背景?? TALEN是一种源于植物致病菌Xanthomonas的崭新的靶向基因操作技术。目前已在人、斑马鱼、水稻、小鼠、大鼠、猪