HPLC-UV-ESI-MS-TLC联用筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂.ppt

HPLC-UV-ESI-MS-TLC联用筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂 答辩人：朱桃玉 指导老师：马志玲副教授 目录 前言 实验 结果与讨论 结语与展望 第一部分 前言 选题意义 研究现状 实验策略 创新之处 1.1 选题意义 乙酰胆碱酯酶抑制剂是治疗老年性痴呆病的临床药物。 本实验以合成的混合物为研究对象，把高效液相色谱法、质谱法以及薄层色谱法成功地应用于筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的合成产物，为寻找更多的药物信息提供了一种新的方法。 1.2 经典研究方法 1.3 实验策略 1.4 创新之处 合成产物的混合体系不经提纯直接进行筛选，特别适合难提纯体系 对合成过程中的副产物进行筛选，从而获得更多有用信息 实现了各种色谱方法的联用 发展了多维薄层色谱法分离同分异构体，同时在薄层板上检测其生物活性 第二部分 实验 研究体系 仪器 试剂 实验方法 2.1 研究体系 2.2 仪器 TLC aluminium sheets Silicagel 60 F254(merck公司） 可调式移液器（Thermolabsystems,0.5～10μL） 1100型高效液相色谱仪（Aligent公司），配有二级管阵列检测器，化学工作站（Agilent ChemStation for LC 3D ） 液相－质谱联用仪（Thermo Finigan公司），配有ESI离子源，化学工作站 2.3 主要试剂 乙酰胆碱酯酶抑制剂混合物（合成产物） 乙酰胆碱酯酶（Sigma公司） 氯化乙酰胆碱（Sigma公司） 5，5－二巯基双－2－硝基苯甲酸（Sigma公司） 2.4 实验方法 二维薄层色谱法分离测定抑制活力 HPLC分离测定混合物 LC-MS定性 展开剂体系 第一维：三氯甲烷：甲醇＝9：1；0.4 mL 0.1 mol/L的三乙胺甲醇溶液；0.3 mL 0.1 mol/L的HCl甲醇溶液；1.0 mL 10 mmol/L的十二烷基硫酸钠甲醇溶液。流动相走过的距离为5.3 cm； 第二维：三氯甲烷：甲醇＝9：1，流动相走过的距离为8.0 cm 两维之间的干燥时间：5 min 2.42二维薄层色谱法测定抑制活力 取2.5 μL 样品溶液点板，在二维展开剂体系展开。逐次喷上氯化乙酰胆碱溶液、DTNB溶液，待硅胶板干燥后喷上新鲜的酶液。5分钟后观察现象。 分别配制2～0.05 mmol/L 的样品溶液，依照上述方法，测定该方法的最小检测量 实验结果 pH的影响 三乙胺的影响 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2 C18 4.6mm×50mm 5um 检测波长：426 nm 流速：1 ml/min 进样量：20μL 流动相：甲醇；1 ％甲酸－三乙胺＝100：4；30 mmol/L十二烷基苯磺酸钠 采用以下淋洗梯度进行分离测定 梯度淋洗 t/min A % B % D % 0 20 78 2 6 20 78 2 8 20 65 15 17 100 0 0 23 100 0 0 其中，A为甲醇； B为1 ％甲酸－三乙胺溶液； D为十二烷基苯磺酸钠溶液。 实验结果 2.33 液相－质谱确定分子结构 色谱条件： 色谱柱：Hypersil BDS C18 2.1 mm×50 mm 3 um 毛细管温度：350 ℃ 喷射电压：3500 V 辅气：鞘气 进样量：20 μL 流动相：甲醇、1 ％甲酸 梯度条件 t/min A % B ％ 0 5 95 6 10 90 12 70 30 25 100 0 实验结果 结论 第三部分 实验结论 结语与展望 本实验成功地把各种色谱方法应用于合成产物的筛选中，进而提供更多的药物信息。 如果能把该方法应用于天然产物的筛选，则对于寻找新药有着重大的意义。 致谢 本论文是在马志玲副教授直接指导下完成的。马老师悉心的指导，让我不仅学会了各种仪器的使用，还学会了她待人处世的态度和一丝不苟的敬业精神。借此机会，我对马老师表示最衷心的感谢！ 在实验的过程中，我同时得到了吴京洪老师的细心的指导和帮助。在此，我对吴老师表示衷心的感谢! 在