L组氨酸产生菌的选育及其特性的初步研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四擞全国发酵工程学术讨论套论文集 L-组氨酸产生茵的选育及其特性的初步研究 陈青山，张伟国 (江南大学生物工程学院，无锝214036) 摘 要：以掣氨哦棒杆酋(Corynebacterium ase-)为出发菌株，利用亚硝基服(NTG)诱变选育得到莽革磺缺陷型的渗鞲突变株 CLW0560，在I；I葡萄糖为碳薄、硫酸铵为氮源的培养基中直接发酵72h，积累L-姐氲酸可达 5．319／L．与亲株相比，o组氟酸产量提高了32．1％．转酮酶比活力下降84．3“．研究了_班 菌株利用培养基中碳深及菌株遗传稳定性．而且考察了壶属离子对CLW0560的影响。 关键词：L-组氟欧’各氨酸棒杆菌}转甯酶}发酵 酸。由于L_组氨酸具有多种生理功能，已经被广泛用于医药、饲料及食品保健等诸多领 域，尤其在医学研究中的作用目益受到重视，属我国氨基酸工业的瓶颈氨基酸之一。日 本早在上世纪七十年代就开展发酵生产组氨酸的研究“1，并达到了较高的产酸水平。而 国内少有研究和报道，产酸水平较低。其中湖北工业大学的曾莹口1等利用黄色短杆菌发 酵可积累组氨酸128．28mg／L，许益清、张伟国01以谷氨酸棒杆菌为出发菌株，定向选育 突变株，发酵72h产L．组氨酸达1～1．69／L。目前市场组氨酸需求很大，价格较高。 本文以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium 发菌株，通过亚硝基胍(NTG)诱变处理，定向筛选莽草酸缺陷型的渗漏突变菌株，进而选 择转酮酶活力降低的菌株，提高了组氨酸产量，目前尚无该法用于组氨酸产生菌育种的 报道。 1材料与方法 1．1菌株 以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium hist／d— a8e一)为出发菌株，该菌株能出发菌在葡萄糖含量为1009／L的发酵培养基中积累组氨酸 4．029／L。 1．2培养基(g／L) 1．2．1完全培养基 葡萄糖109，蛋白胨109，牛肉膏lOg．NaCl59．琼脂209，定容至10·(灭菌前pH7． O)。 1．2．2基本培养基 作者简介：湖北省科技攻关计划项目(2004AA302A01) 陈青山等：L_组氨酸产生菌的选育及其特性的初步研究 87 39，MgS04 ·7H。O0．19，MnSO,·H200．019．FeS04·7H20 0．019，生物紊30／19，硫胺素·HCI 100ug，琼脂209，定容至1L，(灭菌前pH7．o)。 1．2．3补充培养基 基本培养基中添加莽草酸至0．059／L。 1．2．4葡萄糖酸基本培养基 用肛葡萄糖酸代替基本培养基中的葡萄糖。 1．2．5种子培养基 0．59，CaC03 109，定容至1L，(灭菌前pH7．O)。 1．2．6发酵培养基 葡萄糖1009，(NHl)2SO,309，玉米浆59。KH2P04 lg，MgSO‘·7H200．59，CaC03 209，定容至1L，(灭菌前pH7．o)。 1．3诱变方法 亚硝基胍(NTG)诱变处理H．5】。 1．4营养缺陷型渗漏突变株的筛选 ． 将诱变后的菌悬液经中间培养、适当稀释涂布在完全培养基，长出的单菌落经多次 基本培养基和补充培养基对照培养，选择基本培养基上微弱生长而在补充培养基上生长 良好的突变株，从而选育出营养缺陷型的渗漏突变株。 1．5菌体培养 1．5．1种子培养 从完全培养基上接一环菌到装有30mL种子液的250mL三角瓶中，在往复式摇床 上，33℃转速100r／rain，振荡培养12h。 1．5．2发酵培养 33℃转速100r／min，振荡培养72h。