第十章酶型（教案）.doc

昆 明 医 学 院 教 案 教学部门：法医学院 教研室：法医物证学教研室 教师姓名：许冰莹 授课时间：2012年09月05日8：30-10：00时 课程名称 法医物证学 年级 08级 专业 法医学 授课教师 许冰莹 职称 教授 课 型(大、小) 理论课 学时 1.0 授课题目（章、节） 第十一章 酶型 教材（名称、主编、出版社、出版时间、版本） 《法医物证学》，侯一平主编，人民卫生出版社，2010年5月，第三版 教学目的与要求： ＊1..熟悉红细胞酶型的概念。 2.了解多态同工酶在法医学应用中应具备的条件。 ＊3.熟悉ACP的表型与基因型关系，以及遗传规律。 4.了解ACP的等位基因结构与命名。 教学重点、难点： 重点： 红细胞酶型的概念。ACP的表型与基因型关系，以及遗传规律 难点： 分型原理及酶谱技术 教学方法： 传统式教学、顺序讲解、逐级展开、由浅入深，通过案例讲述原理、意义、法医学应用，应用多媒体提供直观教学及学习引导。 多媒体及板书设计要点： 多媒体作为主要的教学辅助手段，提供直观、生动的图解、图释、图片，提供基本概念、基本原理、基本方法，帮助学生记忆、加深学生对教学内容的理解和掌握。 板书作为多媒体的有益补充，利于教师与学生的互动，加深学生对教学内容的掌握和理解，使相关的教学内容的讲解更加深刻、具体和详细。 基本内容 辅助手段和时间分配 第一节 概 述(summary) ＊一.酶、同工酶和酶型的概念(concept of enzyme 、Isozymes and enzyme type ) 1.酶(enzyme) 具有催化活性的蛋白质。 ＊ 2.同工酶(isoenzymes) 指能催化相同的生物化学反应， 但蛋白质分子结构不同的一类酶。 ＊ 3.多态性同工酶 (polymorphic enzyme) 指在同工酶中由遗传基因决定，在不同个体之间表现出酶蛋白分子一级结构差异， 并据此可将人群分为若干类型的同工酶。 二.同工酶的分类及命名（The classification of isozyme and naming） §根据同工酶编码基因的特点：三类 1. 复基因座位同工酶（multiple gene loci） 2. 复等位基因同工酶（multiple allele） 3. 遗传变异体同工酶（genetic variants） ＊三.同工酶的分型的原理和方法（Isozyme typeing principle and method） 原理：利用不同酶分子的电泳特性差异进行检测。 方法：采用凝胶电泳的方法进行分型。 1. 电泳分离（区带电泳或等电聚焦电泳） （1）区带电泳(Zone electrophoresis)： 利用不同酶蛋白分子的大小和所携带电荷数量的差异，在电泳介质中迁移率不同，而形成清晰的区带。并利用酶的催化活性，作用于底物，使之显带，根据电泳谱型进行判型。 （2）等电聚焦电泳(Isoelectric focusing electrophoresis)： 根据不同酶蛋白分子的等电点（ PI ）不同，在pH梯度介质中，酶蛋白分子聚焦在相应的等电点pH位置上，形成狭窄而清晰的区带,使不同PI的酶蛋白分子得以分离。 四.物证鉴定中应用的多态性同工酶应具备 条件 PPt.+板书 40min 2. 酶谱显示(Enzyme spectrum display) 酶蛋白分子经电泳分离后，利用酶特异性的催化活性，在凝胶上原位操作，使之显色，表现出特征性谱带，称为酶谱，据此作出同工酶型的判断。 (1)直接底物显色法(Direct chromogenic substrate method)： 在酶的作用下，无色的底物被酶的催化反应转变成有色产物，从而显现酶的谱带。常用于测定水解酶。 (2)荧光染色法(Fluorescent staining method)： 在酶的催化下，非荧光底物生成高度荧光的产物或荧光底物转化成非荧光产物， 前者称为正荧光染色，后者称为负荧光染色。 (3)电子转移染料染色法(Electron transfer dye staining method)： 在酶的催化下，反应底物转化成新的产物同时，使氧化型辅酶NAD + 或NADP + 还原成NADH或NADPH，同时提供电子。NADPH 在催化剂吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）存在下，使染料噻吩兰（MTT）还原为暗蓝紫色不溶性的甲月替而显示酶谱带。 第二节 红细胞酸性磷酸酶（e