山羊β—酪蛋白基因启动子指导的转基因小鼠乳汁高效表达人凝血因子Ⅸ.pdfVIP

遗 传 学 报，29(3)：206～21l，2002 A Gent~ca Sinica 山羊 -酪蛋白基因启动子指导的转基因 小鼠乳汁高效表达人凝血因子Ⅸ 黄 赞 ，颜景斌。，黄 缨，孙 琼，肖艳萍，黄 英，曾溢滔@ t上悔市儿童医院上海医学遗传研究所．上海 如0040) 摘要：为探讨应用转基因动物乳腺生物反应器高教表达人凝血因子Ⅸ(huroandottingfacfnrIX，hFIX)的可行性．构建 了包括山羊 一酪蛋白基因启动子和虾显子l、内古子1、外显子2共约6 7kb片段以及hFIX垒长cDNA序列和部分 经改造的内古子l的乳腺表达载体，通过转基因技术获得I2个原代转基因小鼠(9旱．3苦)，整合率为l1 2％。经 ELISA和Western blot鉴定8只转基因母鼠乳汁中有hFIX的表达井拥有很高的凝血活性，其中一只的表达量高达 52 9mg／L，其凝血活性亦高达279．2％=FISH实验表明不同的转基因小鼠外源基因整合于小鼠的不同染色体上。 结果证明所构建的山羊 酪蛋白基因启动子乳腺表选载体能有效指导hF／X基因在小鼠乳腺中高效袭达，并能保 持hFIX的生物活性。 关键词：山羊 卢-酪蛋白基因启动子；人凝血因子IX：转基因小鼠；表达 中图分娄号：Q819 文献标识码：A 文章编号：0379—4172【2002)03—0206—06 Hjgh Expression of Human FIX(hFIX)in Transgenic Mice Directed by Goat卢一casein Gene Promoter HUANG Zan。 ， YAN Jing—Bin ，HUANG Ying，SUN Qiong，xIA0 Yah．Ping． HUANG Ying，ZENG Yi—Tao (卧d 血Ⅱe~fMedical 州埘．Shan~,al Children’ 帅 ．5hat．hal 2130040．China) Abstract：To probe the feasibility of efficient production of human clotting factor IX(hFIX)with the approach of mammary gland bioreactor of transgenie animals，we constructed hFIX mamrna~／gland expression vector con． raining promoter，exon 1，intron 1 and exon 2 of the goat日一casein gene about 6． 7kb fragment as well as ful1． 1e g山of hFIX eDNA and its modified intron 1 sequence．By using trmlsgenic products and 12 transgenic founders(9旱，3 )were produced，and the integration rate thusiva8 11 2％ ELISA assav and westem b10t showed that the milk of 8 female transgenic mice had hFIX expression with high clotting activities．The highest hFIX expression in the milk of one transgenie mouse reached 52．9mg／L，and the highest clotting activity of the transgene milk w丑s 279 2％ ．FISH experiments