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微载体固定化脂肪酶催化性能研究 张增伟顾燕松周浩闵瑞 00176 地址：北京经济技术开发区中和街22号北京凯泰新世纪生物技术有限公司1 基金项目：科技部科技型中小企业技术创新基金项目“酯化合成用脂肪酶”，北京经济技术开发区 2008年度科技创新专项资金项目． 摘要：酶的固定化技术是现代生物技术及其工业化环节的一个核心技术，脂肪酶的固定化技术 如今已是决定脂肪酶应用的关键。本文对北京凯泰新世纪生物技术有限公司新开发的F微载体固定 化脂肪酶”产品的催化性能进行了初步研究。结果表明该微载体固定化脂肪酶可以催化棕榈酸异辛 酯、油酸乙酯、脂肪酸甲酯的合成，且转化率在90％以上的批次分别为16、23和35。微载体固定 化脂肪酶催化活性高，稳定性好，使用寿命长，通用性强。有很大的市场应用潜力。 概述 酶的固定化技术是现代生物技术及其工业化环节的一个核心技术，当今固定化酶的 研发已经过渡到理性设计的时代，在实现酶的重复使用或过程的控制的同时，更注重用 适当的固定化技术来改善酶的催化性能及活性、稳定性及选择性，固定化酶技术已经成 为基因工程的互助技术n1。脂肪酶是工业上应用较广的一种酶，它能够在油一水界面或有 机相中催化水解、醇解、酯化、转酯化、内酯合成、多肽合成及手性化合物的拆分等多 种反应，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等领域，是目前被重点关注和研究的 生物酶之一。自1984年ZaksA[21等人首先报道了脂肪酶在有机溶剂中具有较高的热稳 定性和催化活性以来，有机相中酶催化作用的研究迅速成为酶工程学最为活跃的领域之 一，固定化脂肪酶的研究也有了长足的发展。 脂肪酶的固定化技术如今已是决定脂肪酶应用的关键，脂肪酶固定化研究包括新型 载体的开发和固定化方法的拓展，脂肪酶常用的固定化载体包括天然多孔材料、各类凝 胶、合成树脂和复合改性材料等。现在市场上已有的固定化脂肪酶，都是国外产品，为 粒状载体固定化脂肪酶，大多以合成树脂为载体，酶分子通过共价结合的方式实现固定 化。这种固定化脂肪酶酶载量大，活力较高，使用寿命较长，但是生产工艺复杂，成本 高，固定化过程酶活损失严重，工艺对酶自身纯度要求也很高。此类固定化酶价格很高， 一般在几千元／公斤，甚至超过万元，使在国内市的大规模应用受到限制。国内一些大 学和科研机构也经常报道一些脂肪酶固定化的研究成果，但大都处于研究阶段，还未见 有产品问世。目前，已经实现工业化生产的只有北京凯泰新世纪生物技术有限公司与北 京化工大学联合开发的膜载固定化脂肪酶，其具有价格低廉、适应性强、性能优良的特 点，但由于载体是膜状，在通用性上存在一定的问题，膜载固定化脂肪酶需要配套相应 的固定床式的生物反应器才能高效作用。北京凯泰新世纪生物技术有限公司根据国内市 场需求，结合本公司生产的脂肪酶的性能特点，在膜载固定化脂肪酶的基础上，开发了 微载体固定化脂肪酶产品。该固定化酶产品呈球形粒状，使通用性增强；粒径20一35№， 比表面积增大，使催化效率提高；采用了特异吸附与微囊化双重固定化工艺，使稳定性 得到大幅提高。本文通过考察微载体固定化脂肪酶对棕榈酸异辛酯、油酸乙酯、脂肪酸 甲酯合成的作用，对其催化性能进行了初步研究。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1试剂 正己烷、石油醚(沸程60—90)、甲醇为北京化工厂分析纯试剂，油酸为市售化学纯 级试剂，大豆油为市售普通一级食用油，地沟油为本实验净化处理的餐饮废油(酸价 120mgKOH／g油)，微载体固定化脂肪酶为北京凯泰新世纪生物技术有限公司产品(其中 的脂肪酶是本公司以假丝酵母仍力以幽sp．99—125深层发酵获得)。 固定化酶 1．1．2仪器 HZS—H水浴振荡器，岛津气相色谱2010，毛细管柱DB一5HT。 1．2方法 1-2．1水解活力 用橄榄油水解方法测定水解活力，按行业标准QB／T1803—1993进行。 1．2．2棕榈酸异辛酯合成 振荡，反应6小时，酸碱滴定法测定转化率。 1．2．3油酸甲酯合成 水浴振荡，反应8小时，酸碱滴定法测定转化率。 1．2．4脂肪酸甲酯(生物柴油)合成 反应体系：50mL具塞锥形瓶，1．ooOg地沟油(或大豆油)，4ml石油醚，少许水， 140 u 振荡，反应12小时，气相色谱法测定脂肪酸甲酯