新颖的SPR参比型生物芯片.pdfVIP

新颖的SPR参比型生物芯片 三王盎，崔大付’，王军波，郑自攀，蔡浩原 (中国科学院电子所研究所传感技术国家重点实验室，北京，：00080) SPR(surface resonance)生物传感器即表面等离子体谐振生物传感器是上个 plasmon 世纪末期发展起来的新型光学生物传感器，它可以无标记的检测待测物与芯片上固定分 子闻的结合反应。SPR生物传感器可以实时监测芯片表面发生的各种结合、解析反应。 现在SPR已经成为一种成熟的检测生物分子间相互作用的方法。‘。’ 本文讨论了一种新型的SPR生物芯片——参 检测位点 比型生物芯片。图l为SPR参比型生物芯片的示 意图。该芯片分为两个测量位点，两个位点采用 不同的修饰方法，其中一个做为检测位点，可以 固定生物样品，所固定的样品与待测物质发生化 学反应以进行检测：另一个位点作为参比位点， 参比位点 卤 不固定生物样品，可以传感由于温度、浓度等非 反应因素变化引起的SPR信号的变化。 图1SPR参比型生物芯片 灵敏度高是SPR生物传感器的特点之一，它 甚至能测量到由于温度变化而引起的信号变化。 同样温度、溶液浓度等非反应因素的变化也会引起SPR信号的变化。这样的过度灵敏性， 或者可称为过敏性，有时候甚至会影响我们对于反应信号的判断。为了消除这种过敏性 就需要进行一下信号补偿。口’而信号补偿试验的进行又很难保证完全重复发生反应时的各 种条件。SPR参比型芯片的出现解决了这一问题，通过参比位点可以很容易的知道SPR 反应曲线的变化是由于生物反应的进行还是外界因素的变化而引起的。 图2为在SPR2004单通道双参数SPR生化分析仪上采用参比型SPR生物芯片进行 的一次免疫结合试验．图中绿线为参比曲线，红线为反应曲线。反应步骤如图中所示， 芯片活化后通入lmg／ml的人IgG，HBS缓冲液清洗后对芯片进行灭活．避免二抗与芯片 上活性位点的反应。HBS清洗后再通入l：50的羊抗人埯G，然后是HBS清洗。由图2 可见在通入人IgG时反应曲线上SPR信号明显增强，表明括性位点发生了反应并有物质 固定在芯片上；而参比曲线基本上无变化，说明了参比测没有结合反应的发生。通入羊 抗人IgG后反应曲线上信号的增强与参比曲线的不变表明羊抗人IgG与检测位点上固定 的人kG发生了免疫结合反应，而参比位点没有人I窑G固定上去。 参比曲线在整个反应过程中除了由于溶液变化而引起信号变化外没有其它的变化。 说明了参比位点可以发生等离子谐振，但没有化学活性，不会与反应过程中的蛋白发生 反应，具有良好的参比性。 检测样品无需纯化是SPR生物传感器的又一个显著优点，o)这使得它与高效液相色谱等 +通讯残暴人：崔太付E-marl：dfcui@ma—it．ic—．a．c鱼 国家自然科学基金资助项目(NONONO 高灵敏度的分析检测仪器相比具有显著的优势。但是当待测样品溶液中有吸附性强的物 质(如血清中的纤维蛋白等)存在时，某些物质会吸附在未经处理的SPR芯片上，对检 测信号产生影响。参比型芯片的出现较好的解决了这一问题，在固定血清的试验中我们 发现，检测位点信号发生明显变化，而参比位点的信号基本不变。 图2SPR参比芯片上的免疫结 SPR参比型生物芯片的出现，提高了SPR生物传感器的稳定性，拓宽了SPR的测 量领域，减少了非反应因素带来的虚假信号影响。最近我们还将这一芯片应用在SARS 病毒的检测中，并且已经获得了初步的结果。随着SPR参比型芯片及对应仪器的成熟与 完善，相信这一新型葛片必将成为生物研究中的便利工具。 参考文献：