重组大肠杆菌生物合成γ聚谷氨酸的研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四班奎回发酵工程学术讨话套论文采 重组大肠杆菌生物合成丫一聚谷氨酸的研究 曹旭1， 阮红2，范立梅2，徐志南“，岑沛霖1 (1．浙江大学生物工程研究所．浙江杭州310027I 2．浙扛大学城市学院，杭，f|810015) 摘 要：r聚雀氨破是一种可以通过微生物合成的均聚氨基化台物，具有对人体和环境无毒 害矬物可降解性好、可食等优点。丰文首先使用PCR方法l；【高产型枯草芽孢杆菌(Balillus subtilis coll BL21中。高效液相色谱法柱 的重组质牲pXMJl9一pgsBCA，然后将重组质牡转化入E coli BL21／ pXMJl9--pgsBCA合成rPGA的杂件进行了初步的研究。 关键词：r聚各氨酸}重组大肠杆菌}培养条件 7·聚谷氨酸(Poly7-glumaticacid，7一PGA)是一种可以通过微生物台成的均聚氨基 杆菌(Bacillus 认识也不断深入，目前不仅对T—PGA的生物合成途径有了一定的了解，而且在分子生物 的合成每一个都是必不可少的。这三个基因各自编码一种酶，这三种酶组成了一个完整 的合成rPGA的催化体系。 作为一种生物高分子材料，rPGA具有生物可降解性好、对人体和环境无毒害、可食 等优点，因此7-PGA及其衍生物在食品、化妆品、医药和水处理等方面引起了人们的广 泛关注[1。棚。7-PGA可以作为增稠剂o]、保湿耕“、药物载体““、高吸水性凝胶…“”、 可食性纤维“”等。最近研究表明，高分子量的7-PGA在医药领域有着极有价值的应用 前景，例如：高分子量的7-PGA具有增强哺乳动物免疫功能的效果“”。目前对于rPGA 基金项目：浙江省自然科学基金(Y305235) edu．cn 通讯作者：棘志南，浙江大学化工与生物工程系，310027，email：ZILxR@面u 曹旭等；重组大肠杆菌生物合成T一聚谷氨酸的研究 coli)克 大肠杆菌(Ecoli)克隆进行卜PGA生产的研究有着一定的应用前景。 subtills 本实验室已经筛选到一株高产型枯草芽孢杆菌(BalillusZJU-7)，能够高水 平地合成聚谷氨酸(58克／升)[1“口。本论文以该菌的基因组DNA为模板，扩增得到目 pgsA基因的重组质粒pXMJl9一pgsBCA，然后将重组质粒转化人E．coliBL21中。最后 定性检测到重组E．coli E．coli BL21／pXMJl9一pgsBCA合成7一PGA的条件进行了初步的研究。 1实验材料和方法 1．1材料 subtilis 1．1．1菌株BalillusZJU-7：由浙江大学生物工程研究所筛选保藏：大肠杆菌 DH5a：浙江大学生物工程研究所保藏； 大肠杆菌BL21：浙江大学生物工程研究所保藏。 1．1．2PCR反应引物(由sangon公司合成)： 3’l GAGCTTTCAT-了i 1．1．3质粒 vector(TaKaRaBiotech．Co．) 测序载体：T4simple 连接载体：pXMJl9(本实验室保存) ． 1．1．4培养基