低氧时脂肪间充质干细胞如何向跟腱细胞分化.pdfVIP

中国组织工程研究 第 18 卷 第 1 期 2014–01–01 出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research January 1, 2014 Vol.18, No.1 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 81 www.CRTER.org 程涛，男，1988 年生，安 徽省霍山县人，汉族，温 州医科大学在读硕士，主 要从事创伤骨科方面的研 究。 通讯作者：洪建军，硕士， 主任医师，硕士生导师， 温州医科大学附属第二医 院骨科，浙江省温州市 325027 doi:10 3969/j issn.2095-4344. 2014 01.014 [http://www ] 中图分类号:R394.2 文献标识码:B 文章编号:2095-4344 (2014)01-00081-07 稿件接受：2013-10-13 Cheng Tao, Studying for master’s degree, Department of Orthopaedics, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325027, Zhejiang Province, China Corresponding author: Hong Jian-jun, Master, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Orthopaedics, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325027, Zhejiang Province, China Accepted: 2013-10-13 低氧时脂肪间充质干细胞如何向跟腱细胞分化 程 涛1，余 洋1，张小磊2，郑亦静1，楼宇梁1，洪建军1 (1温州医科大学附属第二医院骨科，浙江省温州市 325027；2 浙江大学医学 院干细胞与组织工程研究中心，浙江省杭州市 310058) 文章亮点： 1 脂肪间充质干细胞已成为目前跟腱再生组织工程领域热门的种子细胞，但其具体分化机制以及优化诱导培 养条件尚未完全阐明。 2 实验创新性利用 Transwell 间接共培养体系，最大限度地模拟脂肪间充质干细胞注入跟腱组织内的生长分 化环境。在 4 个时间点比较常氧和低氧环境下脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的能力。通过实时荧光定量 PCR 和免疫荧光染色检测发现低氧环境更有利于脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化。 3 不足之处在于未实施一定的氧体积分数梯度实验，尚未准确探索最佳低氧体积分数。 关键词： 干细胞；脂肪干细胞；跟腱细胞；低氧；常氧；共培养；腱向分化 主题词： 干细胞；间质干细胞；跟腱；缺氧 基金资助： 温州市科技局科研基金资助项目( 摘要 背景：脂肪间充质干细胞在跟腱组织工程再生领域越来越受到重视，研究其诱导分化的有利环境(氧体积分数) 尤为必要。 目的：将脂肪间充质干细胞与跟腱细胞在不同氧体积分数条件下间接共培养，比较氧体积分数对脂肪间充质 干细胞向跟腱细胞分化能力的影响。 方法：无菌条件下获取 SD 大鼠跟腱细胞。SD 大鼠脂肪间充质干细胞直接购买，经培养传至第 1 代后，与跟腱 细胞一起在常氧(体积分数 20%)和低氧(体积分数 2%)条件下经 Transwell 间接共培养体系共培养。在培养 7，14 和 21 d，实时荧光定量 PCR 检测跟腱细胞的特异指标胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ，Tenomodulin， Thrombospondin-4，Scleraxis 基因相对表达量，免疫荧光染色法检测胶原蛋白Ⅰ和 Thrombospondin-4 蛋白表 达量。 结果与结论：脂肪间充质干细胞与跟腱细胞经间接共培养后，低氧组检测到的跟腱细胞的相关特异指标在基 因和蛋白水平上表达水平均高于常氧组。提示氧体积分数可显著影响脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的潜 能，低氧是脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的有利条件之一。 程涛，余洋，张小磊，郑亦静，楼宇梁