5.1DNA的粗提取和鉴定.docVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取和鉴定 【学习目标】 DNA的粗提取和鉴定。 【学习过程】一、DNA的粗提取和鉴定： 实验原理： 1、粗提取原理： 提取生物大分子的基本思路是 。对于DNA的粗提取而言，就是要利用 、 等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 （1）DNA与其他细胞成分在不同浓度 溶液中的溶解度不同；请画出DNA在氯化钠溶液中的溶解度曲线。 （２）DNA和蛋白质对 、 和 的耐受性不同；蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。例如使用________________；大多数蛋白质不能忍受60℃~80℃的高温，而DNA在 以上才会变性。例如可以使用_____________________℃的恒温水浴箱，严格控制温度范围；洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响。 （３）DNA不溶于＿＿＿＿＿＿＿溶液，但蛋白质则溶于＿＿＿。 2、鉴定原理： 在 条件下，DNA遇 会被染成 色，因此____________可以作为鉴定DNA的试剂。另外DNA还能与___________染色剂反应，呈______________色。 （二）实验过程： 1、实验材料的选取： 要选取 含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难。例如可选择__________________________________________等作为实验材料。 2、破碎细胞，释放和溶解DNA： 这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解。如果是动物细胞，直接加入一定量的 ，用玻璃棒搅拌；如果是植物细胞，需先用 溶解细胞膜，再加入____________进行充分的搅拌和研磨。最后过滤，收集滤液。 特别提示：提取鸡血细胞核物质时，应快速搅拌，其目的是加速血细胞破裂。 3、去除滤液中的杂质（DNA的纯化）： 根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性不同等特性，最大限度地将 与杂质分开。 特别提示：向含核物质的2mol/LNaCl溶液中加入蒸馏水析出DNA黏稠物时和DNA黏稠物再溶解于2mol/LNaCl溶液时以及用冷却的95%的酒精提取含杂质较少的DNA时，应轻缓搅拌，目的是尽量保持DNA分子的完整性。 实验中四次过滤（填写下面表格）： 第一次过滤 第二次过滤 第三次过滤 第四次过滤 过滤前加入的物质 蒸馏水 2mol/LNaCl 蒸馏水（至0.14mol/LNaCl） 2mol/LNaCl 过滤目的 滤液中所含物质 纱布上遗留物质 特别提示：（1）实验中两次用到蒸馏水的作用：第一次是提取鸡血细胞中的核物质时，目的是造成低渗环境，加速血细胞破裂，便于DNA析出；第二次是析出DNA过程中加蒸馏水，目的是使DNA的溶解度下降，从而析出DNA。 （2）盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器，因为DNA容易被玻璃容器吸附。 4、DNA的析出与鉴定： 用与滤液等体积的、冷却的 溶液析出DNA；将玻璃棒上的丝状物溶于2mol/LNaCl溶液，加入4ml的 试剂，将试管置于沸水中加热5 min，观察颜色变化。（需设置不加DNA的对照组） （三）注意事项： 1、以血液为实验材料时，不能选择___________动物的血液，因为________________________________________________。取血时，需要加入________________，防止血液凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要________________________。否则容易产生_________________________________________________________。 3、加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧_____________________________________________________________。 4、二苯胺试剂要___________________，否则会__________________。 【巩固练习】 1．在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是 A ．防止凝血 B ．加快 DNA 析出 C ．加快 DNA 溶解 D ．加快凝血 2．下列操作中，对 DNA 的提取量影响较小的是 A ．使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出 DNA 等核物质 B ．搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C ．在析出 DNA 黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加 D ．在用酒精沉淀 DNA 时，要使用冷酒精，甚