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非发酵菌及检验 华中科技大学同济医学院 附属协和医院检验科 曾 吉 非发酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或仅以氧化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌, 需氧或兼性厌氧. 基本特点: 1. 大多数为机会致病菌; 2. 存在于自然环境; 3. 多为正常菌群的一部分; 4. 对很多抗生素有天然的抗药性。 一. 概论 近几年，从临床标本中分离的非发酵菌的比例逐年上升，目前已经约占分离的阴性菌的40%。 非发酵菌的耐药性一般情况下都比肠杆菌科细菌明显，常常表现为多重耐药性，并且耐药性发展很快。 非发酵菌菌病原学分类 假单胞菌属：代表菌为铜绿假单胞菌； 不动杆菌属：代表菌为鲍曼不动杆菌； 窄食单胞菌属：嗜麦芽窄食单胞菌； 伯克霍尔德菌属：洋葱伯克霍尔德菌； 产碱杆菌属：木榶氧化 其他菌属等 非发酵菌与其他细菌的区别 1. 与其他阴性杆菌的区别: 肠杆菌，弧菌科等 2. 与易脱色的革兰阳性菌区别. 辨认非发酵菌的基本方法 1. 在克氏铁琼脂（KIA)上为K/K； 2. 大多数氧化酶阳性； 3. 细菌多不能在麦康凯平板上生长或生长不良. 非发酵菌的初步分群 1. 葡萄糖的利用; 2. 麦康凯平板上生长能力; 3. 氧化酶; 4. 动力. 非发酵菌各菌属间的鉴别 O-F葡萄糖 OX H2O2 尿素 鞭毛 其 它 特 征 假单胞菌属 O/- +/- + -/+ 极生 不动杆菌属 O/- - + - 无 无色杆菌属 O + + -/+ 周生 土壤杆菌属 O + + + 周生 产碱杆菌属 - + + - 周生 黄杆菌属 (F) + + -/+ 无 产黄色素 莫拉菌属 - + + - 无 对营养要求高 金氏杆菌属 (F) + - - 无 艾肯氏菌属 - + - - 无 菌落小 常见不发酵菌的鉴定双岐索引 第 一节 假单胞菌属 (Pseudomonas) 一、 概述 　1. 分类 　2. 临床意义 　3. 微生物特性 　4.微生物检验 　 (1)检验程序 　 (2)鉴定 　 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test) 1.分类 假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种 一群需氧、不发酵葡萄糖 无芽胞，有鞭毛 氧化酶阳性的革兰阴性杆菌 多为条件致病菌 2.临床意义 假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌超过50％，其中主要为铜绿假单胞菌. 3.微生物特性 革兰阴性、无芽胞、专性需氧 有端鞭毛或丛鞭毛 生长温度范围广，最适生长温度为35℃ 产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素 对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药 二. 铜绿假单胞菌 生物学特征： 1：形态和染色; 革兰阴性，长短不一 单鞭毛 生长温度25～42℃ 菌落形态： 常见有5种菌落形态： 典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不规则，表面常可见金属光泽； 大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明； 粘液型：菌落光滑呈粘液状 侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌落； 粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。 有生姜味 可产生多种色素： 荧光素与绿脓素 毒力因子 致病机制 结构成分 粘附素：粘附 荚膜多糖：抗呑噬 毒素 内毒素：LPS 外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和 过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A） 降解 弹性锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白 磷脂酶C: 分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞 （1 ）分离培养与鉴定： 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基 鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等 3.微生物检验 42℃ 生长 明胶 液化 　鞭 　毛 + + 极单鞭毛···铜绿假单胞菌 - + 极多鞭毛···荧光假单胞菌 - - 极多鞭毛···恶臭假单胞菌 OF试验：O 氧化酶：+ 精氨酸水解：+ 葡萄糖酸氧化：+ 　　　　氮气：+ 铜绿假单胞菌的鉴定程序 - 铜绿假单胞菌的最低鉴定特征 单端鞭毛（三根以下） ＋ 97 动 力 ＋ 97 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 ＋ 98 乳糖、蔗糖 － 0 木 糖 ＋/－ 85 氧化酶 ＋ 100 赖氨酸脱羧酶 － 0 精氨酸双水解酶 ＋ 99 鸟氨酸脱羧酶 － 0 H2S产生 － 0 在42℃ 生长 ＋ 100