黄芪不同提取工艺多糖含量的比较.pdfVIP

国 哪 。 黄芪不同提取工艺多糖含量的比较 中国中医研究院基础理论研究所(北京 1。。7。。) 圭盟生 。垫垒重 白卫国 -7． ／ - l pI麓蔓 用水煮醇沉法和超滤法制备黄芪多糖粗提物，采用苯酚硫酸法嗣I定多糖含量，并对多糖粗 提物进行了定性鐾另鼍。结果超滤法较水煮醇沉法含量高出2O 左右。 关键调 ．重童提取工艺j童苎l_ 7k蕉、西喜j啊! 近年研究表 黄苠多糖具有提高小鼠应澈能力，增强免疫功能，双向凋节血糖，保 护 心血管系统，加速遭受放射性损伤机体的修复等作用cl，2]。 当前将黄芪多糖制成各种固体制剂如冲剂等，用水煮醇沉法制备，其口服剂量太，含量 均较低。为此对黄苠不同提取工艺的多糖含量进行了比较 ，以便确定多糖含量高的提取工艺， 为生产试制提供依据。 、 1 材料与仪器 药材来源l黄苠为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaee~13 (Fiseh．)Bge．var． monflhoIieus(Bge．)Hsiao的干燥根。炮炙成饮片，产地山西辉源县。8o 苯酚水溶液l 苯酚 (AR)加0．1％铝片 (预先用稀酸处 理 )及0．05％碳酸氢钠，经蒸馏得新鲜苯酚，避 光保存。取20g新鲜重蒸馏水，加入80g新鲜苯酚，混匀 ． 721型分 光光 度计j HFVF中空纤维超滤器，中空纤维超滤膜(聚砜材料)分子量6000, 截留率9 5 (天津纺织工学院膜天膜技术开发部 )。 ． 2 方法与结果 2．1 样品的制备。a)水煮醇沉法t称取黄芪饮片150g，加水8，6倍量，分别煮沸1h、40 rain分别过滤，合并2次滤液，浓缩至1 l 1(Ig生药相当lm1)，加3倍量95％乙醇沉淀，放置 1 2h以上，离心，沉淀蒸千，称重 ，即 1次醇沉后蒸 千 物。将蒸 千 物平均分成 3份，分别 按1：1 OOj 1：50} 1 l 25比例 (即lg蒸千物溶至1 0 0ml|lg蒸千物溶至 50rob lg蒸千物溶 25ml蒸馏水中)溶 解，(以下简称1 j 1OOj 1：50{1 l 25)放置后，离心，分别取上清液， 再 加 入3倍 量95 乙醇沉淀，冷藏后离心，沉淀物蒸千，分别称重，即2瑰醇沉后多糖粗提 物。b)超滤法。称取黄芪饮片1 5Og，加水倍量，煎煮时间同a)法，合并2次滤液，冷藏后， 离心，取上清液用中空纤维超滤后，截留分子量6000以上的药液，浓缩至1；1(Ig生药相当 1m1)加3倍量9 5％乙醇沉淀，以下按a)项下蒸千物分成3份进行，即2次醇沉后多糖粗提 物。结果见表 1。 2．2 黄苠不同提取工艺多糖含量测定t采用苯酚一硫酸法测定黄苠多糖含量。 2．2．1 回归方程的建立t精密称定D(+)一葡萄糖 (恒重 )o．05g置1ooml容量瓶中 ，加 水使完全溶解，于49 0nm波长处比色，测定吸收度，经直线回归处理，做标准曲 线 。 回归方程 ：A=0．0l 36 J+0．0050C，f 0．9076。 2．2．2 样品含量测定t精密称定上述不同提取工艺制备的2次醇沉多糖粗提物各0．1g，移至 1 ooml容量瓶中，加水至刻度使溶解，摇匀。精密量取该溶液1．0，1．5ml，分别 置5oral容 量瓶中，加水稀释至妻崾 ，摇匀。再精密量取上述2种浓度溶液各2ml,用苯酚一硫 酸 法 以 蒸馏水为空白对照，千490n121波长处比色，测定吸收度，计算多糖含量。结果见表2。 ‘AddresslLi Shuzhen，Institute of Balic Theory。China Acldemy of Ttsditional Chineso M edici~e，Beijlng ‘ ·40S·。 寰1 幂局摄取工艺冀甍多麓枢摄街得 量，收得率比较 裹2 黄甍不局摄取工艺多糖音量比t 尸o．Ol(两{去比较 ) 2．3 黄芪多糖的纸层析鉴别 2．3．1 称取lt 50比例的不同提取工艺制备的多糖粗提物各0．5g，分 q溶于 25ml水中，分 别加／k．3mol／L硫酸溶液2m!，置沸水浴中加热2h，放冷，加饱和氢氧化钡溶液，调pH至中 性，过滤，滤波蒸千，加适量无水乙醇洗至醇渡无色，沉淀蒸千，加水10ml溶解，离 心， 上清液浓缩至5rob 为 水解液。 2．3．2 另取上述相应样品各0．】g，加2ml水溶解，离心，上清液备用，为未水解掖。 2．3．3 称取无水D(+)～葡萄糖，无水L一阿拉伯糖，无水鼠李糖标准品各0．02g， 溶 于2 m1水中，作对照品。 ， 将对照品葡萄糖液、阿拉伯糖液，鼠李糖液各i l，水解液，未水解液各2 1，分别 点 于 层析滤纸上，以正丁醇一吡啶～水 (6，4：3)混合液展开，以邻苯二甲酸～苯 胺 的水饱 和 正 丁醇液显色。结果见图。 圈 黄甍多糖纸层