差异蛋白组学在中医药防治肾间质纤维化中的应用展望.pdfVIP

差异蛋白组学在中医药防治肾间质纤维化中 的应用展望 宋立群 １，马晓鹏１，宋业旭２，贠捷２，马艳春２倡 （１．黑龙江中医药大学附属第一医院肾病科，黑龙江 哈尔滨 １５００４０； ２．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 １５００４０） 摘 要：慢性肾衰竭是严重威胁全球人类健康的一类重大疾病，而肾间质纤维化（Ｒｅｎａｌ Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ Ｆｉｂｒｏ- ｓｉｓ，ＲＩＦ）是慢性肾脏病进展至慢性肾衰竭终末阶段的病理表现和途径。 大量的临床及实验研究证实中 医中药在防治 ＲＩＦ中具有一定的优势和特色，但其确切的作用机制及作用靶点不清，从而影响到其进一 步的推广应用，因此利用现代分子生物学技术，研究中医中药在肾间质纤维化防治中的作用机制及靶 点，将有利于中医中药的进一步发展。 关键词：差异蛋白组学；肾间质纤维化；中医药；展望 中图分类号：Ｒ２５６．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２ －２３９２（２０１３）０６ －００９０ －０３ 收稿日期：２０１３ －１１ －０９ 修回日期：２０１３ －１１ －２４ 基金项目：国家自然科学基金资助（Ｎｏ 作者简介：宋立群（１９５７ －），男，主任医师，教授，博士研究生导师，从事 中医药防治慢性肾病的临床与实验研究。 倡通讯作者：马艳春（１９７２ －），女，副教授，硕士研究生导师，主要从事 、科研和教学工作。 蛋白质组学这一名词最早出现于 １９９４ 年，由 Ｗｉｌｋｉｎｓ和 Ｗｉｌｌｉａｍｓ 提出，是指一个细胞、组织或有机 体在特定的生理或病理时期，所表达的全部蛋白质整 体，包括细胞内所有蛋白质的存在形式以及活动方式。 其研究的主要内容包括：功能蛋白质组学、差异蛋白质 组学以及相互作用蛋白质组学。 其中差异蛋白质组学 是蛋白质组学研究的重要方法，它利用先进的蛋白质 分离技术，获得细胞及生物体在不同时刻或不同状态 下在蛋白质表达上的差异或变化，分析其状态是正常 或是异常的，从而能系统而完整的认识疾病发生过程 中或在药物干预下蛋白质的调控机制以及蛋白质之间 的相互作用。 １ 差异蛋白质组学的分析和鉴定方法 １．１ 所检测样品中蛋白质的提取 差异蛋白质组学的目的是分析生物体内整体蛋白 质，因此样品制备的目标是尽可能的提取样品中的蛋 白质，样品制备的过程是将相比的样品分别进行特殊 的理化处理，以去除样品内的非蛋白成分，而最大可能 的保留全部蛋白质，并进行提取，如果其中的部分蛋白 微溶于水或是疏水蛋白，就需要根据蛋白特性采取相 应的不同提取液进行逐步提取，以最大限度的提取生 物体内的全部蛋白质，提高蛋白质的分辨率［１］ 。 １．２ 样品蛋白质分离 样品中被提取出来的蛋白质理论上包含所提取样 品中所有的蛋白质，要对蛋白质进行鉴定就需要用一 定的技术进行分离。 电泳技术和层析技术是蛋白质分 离的主要技术。 １．２．１ 染色技术 考马斯亮蓝染色（ Ｃｏｏｍａｓ ｓｉｅｂｌｕ ｅｓｔａｉｎｉｎｇ），是快 速测定微量蛋白质的一种常用方法，该方法所需试剂 配制简单，操作过程简便快捷，灵敏度高［２］ ，所需费用 低廉，结果可重复性好，并且该方法能更好的与胶内酶 解及质谱鉴定兼容，是目前最常用的染色方法。 １．２．２ 高效液相色谱技术以及多维液相色谱技术 高效液相色谱技术（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏ- ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）经由普通液相层析和气相色谱改进 发展而来，其优点是具有高温、高效、高分辨率和高灵 敏度等特点，但由于其难以对样品中多组分蛋白进行 多维分析，仅适用一对单一蛋白质或简单样品中蛋白 质组进行分析，不适用于差异蛋白质组学研究。 多维 液相色谱技术（Ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａ －ｔｏｇｒａ- ｐｈｙ， ＭＬＣ）是由高效液相色谱技术与串联质谱联用的 ２Ｄ－ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ，其优点是可快速、高通量鉴定负责 的蛋白质混合物，并且能对样品量较少的蛋白质进行 快速分析，是蛋白质组学研究最主要的技术。 １．２．３ 双向凝胶电泳及差异凝胶电泳技术 每种蛋白质都有其相互独立的特性，即等电点和 ·０９· 中 医 药 学 报 Ａｃｔａ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２０１３ 年第 ４１卷第 ６期 Ｖｏｌ畅４１，Ｎｏ畅６，２０１３ 分子量，Ｏ＇Ｆａｒｒｅｌｌ依据这种特性于 １９７５ 年首次建立了 双向凝胶电泳技术（ ｔｗｏ －ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ －ｓｉｓ，２Ｄ －ＰＡＧＥ），实现了对复杂样品 中蛋白质的整体性分离，并最终获得样品整体蛋白质 的蛋白质组图谱， 但此技术也有一定的缺点：①该技术需要手工操 作，费时费力，并且需要操作者具有很高的