第八九十课时动物细胞工程课件(正式版)综述.ppt

思考题 1、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？ 卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早期胚胎的形成提供营养。 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。 思考题 3.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞. 目前已经成功的实例有： 克隆两栖类、克隆鱼、克隆牛、羊、兔、猴、小鼠等克隆哺乳动物。 克隆动物的研究意义 用于生物学和医学研究的实验动物 改良动物品种 治疗人类疾病 保护濒危动物 存在的问题？ 成功率非常低 绝大多数克隆动物存在健康问题 对克隆动物食品的安全性问题也存在争议 概念： 动物细胞融合，也叫细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 原理： 细胞膜的流动性 三、动物细胞融合 动物细胞融合与植物体细胞杂交过程有什么不同？它相当于植物体细胞杂交的那一过程？ 动物细胞融合技术的基本方法和主要用途是什么？ 1）诱导剂除PEG外还常用灭活的病毒 2）主要用途是生产单克隆抗体 动物细胞融合技术的意义 突破有性杂交的局限，使远源杂交成为可能。用这种体细胞融合的技术，如今已在动物间实现了小鼠和田鼠，小鼠和小鸡，甚至于小鼠和人等许多远缘和超远缘的体细胞杂交。 植物体细胞杂交和动物细胞融合得比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 意义 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去处细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 解决远源杂交不亲和的问题 四、单克隆抗体 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念 2、怎样才能获得单克隆抗体？ 提示1：仅用细胞培养技术可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？ 用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。 实验材料：小白鼠 实验器材：培养皿、针筒等等。 实验过程：如下页 根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案: 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 （1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合? 小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖， B淋巴细胞能够产生抗体。 细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。 （2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。 （3）聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？ （4）整个制备过程为何要经过两次筛选? （第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。） 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。） （5）应用了什么技术： 动物细胞融合、动物细胞培养 基本过程 实验鼠 （接种） 抗原 取得B淋巴细胞 取得骨髓瘤细胞 [诱导融合] 杂交瘤细胞 [培养、筛选单克隆细胞] 能产生特定抗体的细胞群 体外培养 [提取抗体] 体内培养 从培养液中提取 从小鼠腹水中提取 单克隆抗体 原理：杂交瘤细胞已具有“双亲细胞”的特性——既能分泌抗体，又能无限增殖 单抗的主要用途是： 诊断——单抗试剂盒 治疗——抗癌“生物导弹” 预防——传染病易感