核酸蛋白检测中常见问题解析.pdfVIP

DNA，蛋白和碳水化合物的吸收值 蛋白 糖类 吸 光 度 波长 [ nm ] 8 9 No. 10实用技巧实用技巧 显示屏 核酸蛋白检测中常见问题解析 检测后，显示屏显示： 比率 A260 /A280 1.8-2.0 比率 A260 /A230 2.0 稀释度 A230 A260 0.05 （最好在 0.1-1.0 范围内） A280 A320 接近于 0.0 浓度 核酸最高吸收峰的吸收波长 最佳测量值的范围为 0.1 至 1.0 稀释溶液中吸光物质浓度的吸光度可用 朗伯—比尔定律表示： A = ε· c · d 50 μl 样品中 DNA 的浓度必须大于 2.5 μg / ml（ = 125 ng）双链 DNA （A 260 = 1 相当于 50 μg / ml 双链 DNA） A260 nm 如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使 之在此范围内。如果是高浓度样品，也 可以使用 UVette 2 mm 光程长度（即 将 UVette 比色皿旋转 90o 插入）。 如果吸光度小于 0.05 ，检查是否存在 操作因素（如移液不准确，样品内有悬 浮物等）影响。 吸光值是否在 0.1-1.0 之间？ 碳水化合物最高吸收峰的吸收波长 比值可进行核酸样品纯度评估： 纯 DNA 和 RNA 的比值为 2.5。若比值 小于 2.0 表明样品被糖类、盐类或有机 溶剂污染。 A230 nm 如果比值小于 2.0，样品被碳水化合物， 盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。 比值 2.0 ？ I A = log I0 = ε c d朗伯 - 比尔定律： A 吸光值 I0 入射光强度 I 透射光强度 c 吸光物质的摩尔浓度（mol/L） d 光通过的液层厚度（cm） ε摩尔吸光系数，（L mol-1 cm-1） 蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长 比值可进行核酸样品纯度评估： 纯 DNA 的比值为 1.8，纯 RNA 为 2.0。 如果比值低，表示受到蛋白（芳香组） 或酚类物质的污染。 比值 =1.5 相当于 50 ％蛋白质 / DNA 溶液 A280 nm DNA 的比值是否在 1.8 左右， RNA 的比值是否在 2.0 左右？ A260 / A280 A260 / A230 检测溶液样品的浊度 该值应该接近 0.0 。 如果不是，表明溶 液中有悬浮物。可将参数设定至 “Corr. with A320”，进行浊度校准。 A320 nm 如果该值不接近 0.0，样品中存在悬浮 物，需要纯化样品。 此 外，在 参 数 设 置 中，可 激 活 “A320 correction”，进行校准。 检测值是否接近 0.0 ？ +++++ !!!!! – – – – – 检测屏显示错误信息 如果比值低，表示可 能被蛋白或酚类物质 污染，需要纯化样品。 吸光值大于 3.0 计算值不能显示（值过高） 不能计算比值， 因为吸光值为 0.0 或大于 3.0 ● 稀释样品 ● 检查比色皿光程高度是否高于 8.5 mm ● 清洁比色皿 ● 检查比色皿的插入样品槽的方向是否 正确 检查参数设置，可能参数值设置过高 适当稀释样品后，重新检测 DNA，蛋白和碳水化合物的吸收值 蛋白 糖类 吸 光 度 波长 [ nm ] 8 9 No. 10实用技巧实用技巧 显示屏 核酸蛋白检测中常见问题解析 检测后，显示屏显示： 比率 A260 /A280 1.8-2.0 比率 A260 /A230 2.0 稀释度 A230 A260 0.05 （最好在 0.1-1.0 范围内） A280 A320 接近于 0.0 浓度 核酸最高吸收峰的吸收波长 最佳测量值的范围为 0.1 至 1.0 稀释溶液中吸光物质浓度的吸光度可用 朗伯—比尔定律表示： A = ε· c · d 50 μl 样品中 DNA 的浓度必须大于 2.5 μg / ml（ = 125 ng）双链 DNA （A 260 = 1 相当于 50 μg / ml 双链 DNA） A260 nm 如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使 之在此范围内。如果是高浓度样品，也 可以使用 UVette 2 mm 光程长度（即 将 UVette 比色皿旋转 90o 插入）。 如果吸光度小于 0.05 ，检查是否存在 操作因素（如移液不准确，样品内有悬 浮物等）影响。 吸光值是否在 0.1-1.0 之间？ 碳水化合物最高吸收峰的吸收波长 比值可进行核酸样品纯度评估： 纯 DNA 和 RNA 的比值为 2.5。若比值 小于 2.0 表明样品被糖类、盐类或有机 溶剂污染。 A230 nm 如果比值小于 2.0，样品被碳水化合物， 盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。 比值 2.0 ？ I A = l