李明刚《遗传学》第13章 原核基因表达调控.pptVIP

;基因表达调控可分为转录水平调控和翻译水平调控。 转录调控主要发生在起始时期，而不在转录延伸阶段进行调控，但可在终止阶段进行调控，终止可以防止越过终止子而进入下一个基因的转录。 1961年Jacob和Monod提出基因表达调控经典模式。将DNA序列分成两种类型：编码反式作用因子(trans-acting factor)编码序列和顺式作用元件(cis-acting element)。基因的活性调控主要通过反式作用因子和顺式作用元件的特异性相互作用而实现。 基因是编码可扩散产物的DNA序列，其产物可以是蛋白质或RNA(tRNA和rRNA)。基因产物要从合成的场所扩散到其发挥作用的场所。游离的基因产物扩散至其目标场所的过程称为反式作用(trans-acting)。 顺式作用(cis-acting)指不转变为任何其它形式的DNA序列，只在原位发挥DNA的作用，仅影响与其在物理上相连的DNA。可分为结构基因(structural gene)和调控基因(regulator gene)的概念。;图10.1 调节基因编码的蛋白与DNA特定的靶位点作用。;正调控和负调控的共同点是调控蛋白(regulatory protein)都是反式作用因子，它们通常识别位于基因上游的顺式作用元件。尽管调控蛋白结合DNA的实际长度较长，但仅识别DNA上很短的序列，一般小于10bp。 在细菌中，正调控和负调控使用的频率可能大致相等，但在真核生物中，最常见的调控方式是正调控。在典型的默认(default)状态下，真核基因不具活性，RNA聚合酶不能在启动子处单独开始转录。 反式作用因子在启动子附近有作用位点，其中一些或所有因子的结合使RNA聚合酶能起始转录(图10.2)。;正调控：能激活基因转录的调控。受正调控机制调控的基因，仅当活性调控蛋白存在，并与顺式元件结合或与RNA聚合酶相互作用，转录才被激活(图10.3)。 正调控蛋白应答的小分子物质称为激活物(activator)。 根据应答小分子的性质，操纵子可分为诱导型(inducible)和阻遏型(repressible)两种。 原核生物和真核生物的基因的组织形式差异很大，细菌的结构基因一般成簇(cluster)排列，而真核生物的基因则是独立存在。成簇排列的结构基因能受单一启动子共同控制：结果使整套基因或者表达或者都不表达。;?1961年法国科学家Jacob和Monod发现大肠杆菌在含有乳糖的培养基中会诱导合成大量的β-半乳糖苷酶，而在没有乳糖的环境中却不产生，从而提出了乳糖操纵子。 图10.4 乳糖操纵子长度约为6000bp。左端的LacI基因有自己的启动子和终止子，LacI基因的末端紧接启动子P。操作基因O占据LacZ基因的前26bp，LacZ基因之后是LacY基因和LacA基因以及终止子。;图10.5 围绕着乳糖操纵子转录启始位点，阻遏蛋白和RNA聚合酶的结合区域相互重叠。 ;图10.7 阻遏蛋白与操纵子结合，使乳糖操纵子处于失活状态，加入诱导物以后，阻遏蛋白被释放出来，才允许RNA聚合酶起始转录。;乳糖操纵子阻遏蛋白具有两种识别功能 1) 能识别操纵子上特定的操纵基因的序列； 2) 能识别乳糖或乳糖类似物。 当阻遏蛋白与乳糖或类似物结合时，阻遏蛋白的构型将发生变化，从而使阻遏物失去了对操纵基因的亲和作用。阻遏物将从DNA上脱落下来。 对Lac系统阻遏作用的解除称为诱导，能使阻遏物失活并导致Lac基因表达的乳糖类似物称为诱导物。;导致Lac基因表达的乳糖类似物诱导物异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthiogalactoside ，IPTG)，称为安慰诱导物。; 操纵基因和操纵子;;图10.7 阻遏蛋白与操纵子结合，使乳糖操纵子处于失活状态，加入诱导物以后，阻遏蛋白被释放出来，才允许RNA聚合酶起始转录。;图10.8 操纵子发生突变的结果是组成型表达，因为突变阻遏蛋白不能与操纵子结合，从而使RNA聚合酶与操纵子的结合不受限制。操纵子突变为顺式作用，只影响相同链上连续的一系列结构基因。;图10.10 通过突变可以确认并绘制LacI基因内不同的功能区：DNA结合区通过N端的LacI-d突变确认；如果发生了LacI-突变则在220-280bp之间不能成四聚体，其他的LacI-突变在整个基因都存在；LacIs突变在62-300bp之间呈规律性分布。;分解代谢产物调控;图10.22 cAMP只有一个磷酸基团与糖环的3?和5?相连。 分解代谢产物阻遏(该操纵子简称CRO)。 它是由cAMP水平下降导致CAP(catabolite activator protein) /(Catabolite repression，CRP)调节蛋白失活而引起的。 ;多基因座阻遏调控 ;图10.20 操纵基因的位置