细菌学教学课件 第十六章 细菌与生物制药.pptVIP

* 组合生物转化技术 组合生物转化是指利用一种以上具有特殊转 化功能的微生物或酶， 对同一个母体化合物进行 组合转化， 以得到化学结构多样性的化合物。例 如， 用 种不同的酶对一个腺苷分子进行两轮催 化， 可以得到 种各种类型的衍生物。该方法是 从已知化合物中寻找新型化合物的有效手段 ［ ］ 。 组合生物合成技术 组合生物合成技术是指对微生物次级代谢产 物合成途径中涉及的一些酶的编码基因进行互换 组合， 由此产生一些非天然的基因组或杂合基因， 从而产生许多新的 “非天然的天然化合物” ， 它是 组合化学的有益补充。国外有学者从红霉素等抗 生素的生物合成基因着手， 进行组合生物合成的 研究， 当前应用最多的是聚酮类化合物 （ ） 的组合生物合成， 如红霉素、 利福霉素的重 组与改造。此类抗生素涵盖了大环内酯类、 四环 类、 蒽环类和聚醚类抗生素， 其生理活性包括抗感 染、 抗肿瘤和抗寄生虫等， 极有研究价值 ［ ］ 。 基因芯片基因组技术 其原理是根据微生物基因组研究的成果， 确 定目标基因的 序列， 设计和合成针对每个基 因的寡核苷酸， 并连接到芯片的微孔， 通过样品杂 交， 扫描获得相关的信息， 应用计算机处理， 从中 发现重要的数据。该技术已用于获得高产抗生素 基因工程菌株。 聚合酶功能修饰技术 聚合酶能够把 序列中的遗传信息 转录为信息 ， 是基因表达的第一个环节， 也是 表达调控的关键靶位， 通过修饰 聚合酶的功 能可以调节某些抗生素的生物合成水平， 有研究 表明， 引入利福平的抗性能够导致多种编码 的聚合酶 亚基因的突变， 朱宝泉等通过筛选利 福平抗性突变株， 经系列考察， 确定不同的突变对 突变株的生长和抗生素生产产生完全不同的影 响， 暗示 聚合酸酶的结构和功能与抗生素生 物合成基因的表达存在一定的关系 ［ ］ 。 核糖体工程技术 细胞生物学和分子遗传学研究揭示核糖体的 功能是负责把编码在 中的遗传信息翻译为 功能蛋白质。研究表明， 通过修饰核糖体的功能 能够活化或加强微生物合成抗生素的水平， 证明 核糖体工程技术能够应用于微生物药物的研究， 这一方法已经成功地应用于抗生素生产菌种的选 育和新抗生素的发现。 星报菌素(STR)是从微生物Saccharothrix中筛选获得的，具有抑制PKC的活性，同时它对多种蛋白激酶如PKA、PKG、PTK、肌球蛋白轻链激酶等都有抑制作用，是一种非选择性的酶抑制剂，因此主要是开发它的衍生物，并寻找对PKC具有高度选择性的这类化合物。 从芽枝酶中分离得一暗红色物质UCN1028A，对PKC和PKA的IC50分别为0.19ug/ml和＞40ug/ml。显示出强的细胞毒性，对肿瘤细胞MCF-7和HeLaS3的IC50分别为0.21ug/ml和0.29ug/ml。 2. PTK抑制剂 根据结构可以分为： 受体酪氨酸蛋白激酶(RTK)： 如EGFR(表皮生长因子)、PDGFR、FGFR、IR等 非受体酪氨酸蛋白激酶(NRTK)： 如Src、Abl、FAK、janus激酶等 它们对调解肿瘤细胞的生长及分化起到重要的作用，但PTK的过度表达导致PTK活性增加将严重影响下游信号转导，如EGFR及HER-2的过度表达经常在一些癌细胞中发现，PTK的活性已经成为细胞增殖恶变的标志之一。因此人们利用PTK抑制剂来抑制肿瘤细胞及一些增生疾病。 4’,5,7-三羟基异黄酮来源于假单胞菌属，是PTK的特异性抑制剂，可抑制包括EGFR、pp60v-src等酪氨酸蛋白激酶，以及抑制完整的A431细胞中PTK活性。 近年来对4’,5,7-三羟基异黄酮进行的体外抑制肿瘤细胞生长的研究较多，对乳腺癌细胞株、前列腺癌细胞株、大肠癌细胞株等多种细胞都有明显的体外抑制活性。但对其诱导细胞凋亡的机制尚不清楚，能否在临床上用于多种癌症的治疗还需进一步研究。 四、微生物来源药物的研究前景 分离筛选产生新的生物活性物质的菌株； 选育高产菌种； 改进发酵装置和发酵工艺； 将现代生物技术应用到生产实践中； 基因工程等在微生物发酵制药中的应用。 微生物药物创制的途径、 方法与新技术的应用 扩大微生物来源，寻找新的有药用价值的生理活性物质 ； 建立新的筛选模型， 寻找非抗生素类生理活性物质 ； 应用定向生物合成和突变生物合成的原理寻找新的次级代谢产物 ； 对已知化合物进行化学改造 （如半合成）寻找效果更好的生理活性物质 ； 利用基因工程技术构建新的微生物工程菌株，这一技术与手段的应用一方面可以大幅度提高产率， 另一方面可以获得新的化合物。 举例：高通量药物筛选平台简介 创新药物发现 免疫学分析 细胞分子生物学 特有的报告 转基因小鼠 活体动物成像 细胞因子分泌、 转录因子表达