重组人Midkine真核表达载体的构建以及蛋白表达和纯化.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2014年，第 33卷，第 2期，第 228—233页 Genomics and Applied Biology，2014，Vo1．33，No．2，228—233 研究论文 Research Article 重组人Midkine真核表达载体的构建以及蛋白表达和纯化 徐杨琪 1 李京敬2 关文 1 郜尽 2 贾世香 3 屠平 3 韩伟 2 俞雁 1 1上海交通大学农业与生物学院，上海，200240；2上海交通大学药学院，上海，200240；3交晨生物医药技术(上海)有限公司，上海，200240 通讯作者，yanyu@sjtu．edu．cn 摘 要 MidkinefMK)是一种肝素结合型生长因子，在胚胎早期的分化发育、肿瘤、炎症、再生等方面发挥着 重要的调控作用。本研究将人 MK(hMK)全长基因构建到 pPICZa(B)表达载体上，通过化学转染方法，转染 质粒至不同酵母菌株中进行筛选，利用毕赤酵母的高密度发酵进行表达，纯化出高纯度的重组人 Midkine (rhMK)，并通过试验证明，纯化的 rhlVIK具有趋化UMR106细胞的活性。rlfVIK的真核表达与纯化方法的建 立为后续的药效学试验奠定了基础，并对其它蛋白的真核表达、纯化也有一定的参考意义。 关键词 中期因子，毕赤酵母，发酵，离子交换层析，高效液相色谱 Expression and Purification of Mature Human Midkine(hMK)in Pichia pastorts Xu Yangqi Li Jingjing Guan Wen Gao Jin Jia Shixiang Tu Ping Han Wei Yu Yan 1 School of Agriculture and Biology，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai，200240；2 School of Pharmacy，Shan ghai Jiao Tong University Shanghai，200240；3 General Regeneratives Limited，Shanghai，200240 Corresponding author，yanyu@sjtu．edu．cn DOI：10．134170．gab．033．000228 Abstract Midkine(MK)is one of the heparin—binding growth factors that arc：strongly expressed during embryo— genesis．It is vigorously involved in development and regeneration of normal tissues，as well as in inflammation and tumorigenesis．To facilitate further studies of recombinant human MK(rhlVIK)．we developed a strategy for ex- pressing an d purifying rh]V[K using Pichia pastoris expression system．This s~ategy is simple an d eficient with construction of expression vector，high—density ferm entation and one—step of cation exchange chromatography． Furthermore，the biological activity of final product was verified with migration assay on UMR-1 06 cells．The strategy will facilitate the physiological and pathological research of MK and have reference values for the expres— sion and purification of other proteins． Keywords Midkine，Pichia pastoris，Ferm entation，Ion exchange chromatography，HPLC Midkine(MK)是 1988年日本学者 Kadomatsu等 (1988)在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系 HM一1 细胞 eDNA文库中发现的一种新基因，它在体内的 分布随胚胎发