β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响的论文.docVIP

　　β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响的论文 β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响 【关键词】 结肠肿瘤;抗原,cd29;细胞增殖;药物筛选试验,抗肿瘤 【摘要】 目的观察β1整合素表达下调对人结肠癌ht-29细胞增殖和化疗敏感性的影响。方法采用反义寡核苷酸(asodn)技术转染ht-29细胞，逆转录-聚合酶链反应(rt-pcr)检测β1整合素表达下调情况。mtt法检测ht-29细胞相对存活率。给予梯度浓度氟尿嘧啶(5-fu)，计算ic50。结果实验组β1整合素条带吸光度积分(iad)值/β-actin条带iad值的比值及ht-29细胞的存活率与对照组相比显著降低(f=1 630.08,q=72.40,plt;0.01;t=4.37,plt;0.05)。5-fu+asodn组ht-29细胞对5-fu的ic50与5-fu组比较显著下降(t′=37.71,plt;0.05)。结论β1整合素表达下调可抑制结肠癌细胞增殖，增强结肠癌细胞对化疗药物敏感性。 【关键词】 结肠肿瘤;抗原,cd29;细胞增殖;药物筛选试验,抗肿瘤 　[abstract]objectiveto investigate the effect of doosensitivity of human colon cancer cell line ht-29.methodsht-29 cells rna expression ined by mtt method. gradient concentrations of 5-fluorouracil (5-fu) rna of ht-29 cells in the experimental group arkedly doarkably decreased (t′=37.71,plt;0.05).conclusiondoan colon cancer cell to chemotherapeutics. 　　[key s; antigens, cd29; cell proliferation; drug screening assays, antitumor 　　结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年增高。.肝转移是影响结直肠癌预后的重要因素，无法切除肝转移灶病人的中位生存期仅6.9个月[1]。目前，手术仍是惟一有效的治愈手段，但仅有10%病人适合于手术切除。现有的化疗药物大多疗效欠佳，因此降低药物副作用、增强化疗敏感性已成为目前结肠癌治疗的研究热点。整合素主要介导细胞与细胞外基质(ecm)的黏附，是一类最重要的细胞黏附分子。整合素还介导细胞间的黏附，参与细胞多种生理功能和病理变化。谭晓杰等[2]研究显示，β1整合素反义寡核苷酸(asodn)通过降低β1整合素表达，对人结肠癌ht-29细胞体外侵袭具有抑制作用。本实验采用asodn技术使人结肠癌ht-29细胞β1整合素表达下调，观察β1整合素表达下调对ht-29细胞增殖和对化疗药物敏感性的影响。 　　1资料与方法 　　1.1细胞培养 　　人结肠癌细胞株ht-29购于武汉同济医院。将细胞接种于含体积分数0.10小牛血清的rpmi 1640培养液(gibco公司)中，在37 ℃、95%湿度及体积分数0.05 co2的培养箱中培养，每48 h胰酶消化传代1次，实验所用细胞均处于对数生长期。 　　1.2asodn技术 　　β1整合素asodn序列为:5′-t*g*cagtaagcatccat*g*t-3′，无义寡核苷酸(nsodn)序列为：5′-g*c*aacgagagagccgt*c*g-3′,*为硫代位点，由大连宝生物公司合成。实验分3组：实验组(以脂质体转染asodn)、nsodn组(以脂质体转染nsodn)和对照组(未转染)。在聚苯乙烯管中以无血清rpmi 1640培养液分别稀释asodn、nsodn和lipofectamine 2000脂质体，asodn及nsodn浓度均为120 mg/l，lipofectamine 2000脂质体终浓度为10 mg/l。分别将两管稀释液轻轻混匀以便形成寡核苷酸-脂质体复合物，于室温下放置40 min。取对数生长期的ht-29细胞，使用无血清的rpmi 1640培养液洗1次，然后缓慢加入寡核苷酸-脂质体复合物，置于37 ℃、95%湿度及体积分数0.05 co2的培养箱中培养6 h，弃去转染液，换含体积分数0.20胎牛血清的rpmi 1640培养液继续培养48 h。 　　1.3rt-pcr检测β1整合素mrna的表达 　　采用trizol总rna纯化试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)提取总rna，用逆转录酶和oligo(dt)按37 ℃ 1 h，95 ℃ 5 min条件进行cdna 的合成。取1 μ