基于尼古丁对胆碱氧化酶的抑制作用测定尼古丁的研究.pdfVIP

第 33 卷 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究报告 第 4 期 2005 年 4 月 Chinese JOurnaI Of AnaIyticaI Chemistry 479 ~ 482 基于尼古丁对胆碱氧化酶的抑制作用测定尼古丁的研究 阳明辉 杨云慧 沈国励＊ 俞汝勤 （湖南大学化学化工学院，化学生物传感与计量学国家重点实验室，长沙 410082） 摘 要 基于尼古丁对胆碱氧化酶（CHOD）的抑制作用，将胆碱氧化酶电极用于微量尼古丁的测定。酶电 极制作中，先在铂电极表面修饰一层壳聚糖膜，再用戊二醛交联 CHOD。采用这种酶固定化方法，电极在 4. 0 X 10 - 6 ~ 3 X 10 - 3 mOI / L 胆碱的浓度范围呈线性关系。探讨了工作电位、pH、底物浓度等实验条件对酶电极 性能及抑制过程中响应电流的影响，测定了电极的重现性、干扰及使用寿命。电极检测尼古丁的线性范围为 1. 5 X 10 - 5 ~ 3 X 10 - 3 mOI / L；检出限为 1. 25 X 10 - 5 mOI / L。将电极用于实际样品烟草中尼古丁回收率的测定， 结果良好。 关键词 电极，胆碱氧化物酶，抑制作用，尼古丁 ! 引 言 尼古丁又称烟碱，是烟草中含量最多的一种生物碱，广泛用作农业中的天然杀虫剂。尼古丁的成 瘾作用和致癌性以及对健康的危害一直是人们研究争论的焦点。测定尼古丁的方法主要有光度法、色 谱法和原子吸收光谱法等［1 ~ 3］。文献中已报道尼古丁对胆碱酯酶活性的抑制用于尼古丁的测定［4］，但 基于抑制胆碱氧化酶用于对尼古丁的测定尚未见报道。本研究采用铂电极为基体电极，在电极表面修 饰一层壳聚糖膜，以戊二醛共价交联胆碱氧化酶［5］，研制成一种性能良好的胆碱氧化酶电极，利用尼古 丁对胆碱氧化酶的抑制作用，将此酶电极用于尼古丁的测定，方法简便快速，检出限低，线性范围较 宽，电极使用寿命较长。 # 实验部分 #. ! 仪器与试剂 XJP-821（C）型新极谱仪（江苏电分析仪器厂）；ZF-10 数据采集存储器（ 上海正方电子电器有限公 司）；SB2200 型超声仪（上海必能信超声有限公司）；电化学反应池为三电极系统，其中胆碱氧化酶修饰 电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为对电极。胆碱氧化酶（ CHOD；E. C 1. 1. 3. 17 frOm AIcaIigenes ；13. 1 U / mg）、溴化胆碱（ CHO）（ Sigma 公司）、壳聚糖（ 上海生化试剂公司）；尼古丁 （99% ，德国 Merck-Schuchardt 公司）；其他试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。 #. # 胆碱氧化酶传感器的制备 准确称取 1. 0 g 壳聚糖溶于 100 mL 1. 0% 的醋酸溶液中，在室温下连续搅拌直至完全溶解，得透明 的壳聚糖溶胶。将铂丝电极（ ）于金相砂纸上打磨，后放入 、 以 ! = 0. 2 mm 1 mOI / L HNO3 1 mOI / L HCI 及 1 mOI / L NaOH 中各超声清洗 20 min，后在清水中超声清洗 5 min。取 5 !L 壳聚糖溶液滴于铂电极 表面并在室温下自然晾干成膜，用水洗净后，取 5 !L 0. 25% 戊二醛滴于电极表面并反应 30 min，用水 清洗后，再于膜表面滴加 2 !L CHOD