基于核酸适配体的新型荧光纳米生物传感器用于凝血酶的测定.pdfVIP

Vol. 27 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 12 2 0 0 6 年 12 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 2266 ~ 2270 基于核酸适配体的新型荧光纳米生物 传感器用于凝血酶的测定 徒永华1 ，程圭芳1 ，林 莉1 ，郑 静1 ，吴自荣2 ，何品刚1 ，方禹之1 （1. 华东师范大学化学系，2. 生命科学学院，上海 200062） 摘要 利用凝血酶的两条核酸适配体与凝血酶的高亲和力构建了三明治结构，利用磁性纳米颗粒的磁性分 离技术，设计并制作了一种新型的荧光纳米生物传感器，用其检测凝血酶. 此法对凝血酶的响应线性范围为 2. 24 10 - 11 ~ 4. 03 10 - 9 mol / L，其线性方程为 ! = 0. 9758 1011 - 2. 628，检出限为 1. 0 10 - 11 mol / L，对 浓度为 2. 68 10 - 10 mol / L 的凝血酶检测 10 次，其 RSD 为 2. 56% ，测得的荧光信号稳定，24 h 后测定并无衰 减，具有很高的检测特异性和灵敏度. 关键词 核酸适配体；凝血酶；磁性纳米颗粒；荧光 中图分类号 O652 文献标识码 A 文章编号 0251-0790（2006）12-2266-04 肿瘤组织对周围组织的侵袭、转移的形成以及肿瘤组织和肿瘤患者血液本身的变化均可导致病人 凝血机制的改变，产生不同程度的出血倾向. 凝血酶是一种重要的生理蛋白酶，在血液凝固、炎症和 创伤愈合等生理及病理过程中发挥重要作用，因此检测凝血酶在医学上具有重要意义. 凝血酶 （Thrombin）的浓度及活性是衡量凝血机制的重要指标，对揭示肿瘤的发生机制，或作为早期诊断、分 ［ ］ 子分型、疗效及预后判断具有重大意义 1 . ［ ］ ［ ］ 传统上直接测定凝血酶的方法主要有发色底物法 2 和荧光法 3 . 发色底物法利用凝血酶切断其与 发色肽的作用点精氨酰与对硝基苯胺相连的肽键，使对硝基苯胺游离出来. 当对硝基苯胺与肽链相连 时，其溶液为无色液体，当它游离存在时，显浅黄色，溶液在 405 ~ 410 nm 波长处对光有最大吸收，据 ［ ］ 此可进行定量测定 4 . 该法简单易行，但灵敏度不高，不宜进行微量分析. 荧光法是将荧光底物与凝 血酶结合，通过测定荧光强度可以得出凝血酶的含量. 单纯使用荧光法需要用荧光底物标记凝血酶， 操作步骤繁琐，荧光背景不易降低，灵敏度低. ［ ］ 核酸适配体（Aptamer）是通过 SELEX 技术 5 筛选出来的，可以特异性结合目标分子如蛋白质、氨 基酸、有机小分子及一些无机离子的核酸序列片断. 核酸适配体和蛋白质等目标分子的结合与抗体和 ［ ］ ［ ］ 抗原结合相类似 6 ，具有很强的专一性和选择性 7 ~ 10 . 由于不是所有的蛋白都能找到与之一一对应的抗原或抗体，而标记蛋白往往会造成蛋白的活性降 低甚至失活，传统的免疫蛋白分析不能适应发展需要.