乌圆补血口服液对D半乳糖和亚硝酸钠所致痴呆模型小鼠生化指标的影响.docVIP

　　乌圆补血口服液对D半乳糖和亚硝酸钠所致痴呆模型小鼠生化指标的影响 作者：陈莉 刘小艳 黄日越 谭智俊 钟文晴 黄秀勤 龙奇军 张树球 【摘要】 目的 研究以何首乌和桂圆肉为原料的乌圆补血口服液对老年痴呆小鼠模型大脑和血液生化指标的影响。方法 用D半乳糖和亚硝酸钠混合液给小鼠腹腔注射，每天1次，连续60 d造模。造模30 d后， 治疗 组用乌圆补血口服液灌胃治疗，模型组和正常组用等体积蒸馏水灌胃。实验结束，取血分离血清，处死小鼠，取大脑制备10%脑匀浆，测定血清和脑匀浆生化指标。结果 脑匀浆乙酰胆碱脂酶（TchE）活力，模型组、正常组和治疗组分别为(1.709±0.498)、(1.436±0.313)、(1.182±0.157) U/mg port，模型组明显高于其他两组（P＜0.05和P＜0.01）；丙二醛（MDA）含量分别为(7.935±0.775)、(6.934±1.284)、(6.356±0.799) nmol/mg prot，模型组明显高于治疗组（P＜0.05）；血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活力分别为(329.760±28.438)、(370.038±25.130)、(311.300±29.952) U/ml，正常组明显高于模型组和治疗组（P＜0.01）；脑（O2）氧自由基清除率（%）分别为(2.346±1.167)、(7.366±3.413)、(8.672±3.519)，治疗组和正常组明显高于模型组（P＜0.01）；脑蛋白含量、脑GSHPx、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、尿素等，各组间无明显差异。结论 乌圆补血口服液有明显改善D半乳糖和亚硝酸钠联合痴呆模型小鼠大脑乙酰胆碱酯酶活性和增强抗氧化功能。 【关键词】 老年痴呆症模型；乌圆补血口服液；乙酰胆碱脂酶 老年痴呆症（AD）以认知能力和记忆力迅速减退为主要特征，而认知能力和记忆力目前认为与大脑胆碱能神经有关。乙酰胆碱是胆碱能神经的神经递质，胆碱乙酰转移酶和乙酰胆碱酯酶(TchE)活性分别控制乙酰胆碱的生成和分解。因此，胆碱乙酰转移酶和TchE活性成为测定的重要指标。本研究利用D半乳糖和亚硝酸钠联合造模〔1〕，用乌圆补血口服液灌胃治疗，测定大脑TchE活性、丙二醛(MDA)和血清生化指标的变化，并与对照组对比分析。现将实验结果报道如下。 1 材料与方法 1.1 试剂 D半乳糖、亚硝酸钠、氯化钠、过硫酸铵、盐酸羟胺、对氨基苯磺酸、α萘胺、HCl、Tris、TEMED、正丁醇，均为国产分析纯。TchE测定试剂盒、MDA测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）测定试剂盒、考马斯亮兰试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、尿素、丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒、总蛋白测定试剂盒，均购自四川省迈克科技有限责任公司。 1.2 动物 小白鼠45只，鼠龄5个月，健康，雌雄各半，由右江民族医学院动物实验室提供。分成3组，每组15只，即模型组、正常组、治疗组。分笼喂养，每笼5只。 1.3 动物实验造模 模型组和治疗组造模。用D半乳糖按100 mg/kg体重剂量，亚硝酸钠按90 mg/kg体重剂量，用生理盐水溶解稀释，两液混合后腹腔注射，每天1次，连续60 d。 1.4 治疗 造模到30 d后，治疗组用乌圆补血口服液，按0.05 ml/只剂量，用蒸馏水稀释至0.3 ml灌胃，每天1次，直至实验结束。其余两组用等体积蒸馏水代替。 1.5 中药 乌圆补血口服液〔何首乌（制）0.5 g/ml生药（干），龙眼肉0.3 g/ml生药（干）〕。 1.6 测定方法 超氧阴离子自由基（O2）清除率用化学比色法测定〔2〕；MDA用TBA（硫代巴比妥酸）显色法测定；GSHPx用其催化H2O2与GSH反应，GSH可与二硫代二硝基苯甲酸作用生成黄色化合物，进行比色测定；TchE测定用TchE催化水解乙酰胆碱生成胆碱和乙酸，胆碱与巯基显色剂反应生物TNB黄色化合物，进行比色测定。具体操作按各试剂盒说明书。 实验结束从眼球取血，分离血清待测。处死动物，取大脑，用生理盐水洗去血液，滤纸吸干多余水分，称重，在冰浴下用玻璃匀浆器匀浆，用生理盐水制成10%脑匀浆，在3 500 r/min离心10 min，取上清于另一试管内，放冰箱内冷冻待用。 1.7 统计学处理 用上海科技出版社SSTP软件（2.00版）处理数据并进行方差分析。 2 结 果 2.1 脑蛋白、TchE和MDA测定结果 见表1。每组脑蛋白无显著性差异（P＞0.05）；模型组TchE活力明显高于正常组和 治疗 组（P＜0.05和P＜0.01）；MDA含量模型组明显高于治疗组（P＜0.05）。表1 各组